复杂化合物分离技术作业之《毛细管电泳》.docxVIP

复杂化合物分离技术题 目 毛细管电泳-HPCE 姓 名 所在学院 组号 学 号 执教教师 毛细管电泳技术-HPCE 摘要：通过查阅相关书籍与论文资料,本文将对毛细管电泳技术做大致介绍,并阐述毛细管电泳分离技术的基本概念、基本理论（原理）、特点、应用范围和应用实例等内容.关键词：电泳 毛细管 电渗流 迁移速率基本概念一、电泳概念带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)，利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。按形状分类有：U型管电泳、柱状电泳、板电泳；按载体分类有：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、自由电泳；二、高效毛细管电泳概念1981年，Jorgenson等用75μm内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳。毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE），是一类以毛细管为分离通道、以高直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容。具体地说：高效毛细管电泳（HPCE）就是在毛细管中进行电泳,指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一项液相分离技术。是以电泳强有力的分离机理与色谱的仪器及自动化相结合的产物，可看作是电泳的一种仪器化方式。毛细管电泳可以理解为在一个小管道里面电泳，而经典电泳就是在一个平板上电泳。CE是经典电泳技术和现代微柱分离技术相结合的产物。基本原理一、分离原理带电粒子在毛细管中，受强电场的作用向相反的电极迁移，从而将各种物质分离。毛细管电泳分离技术分离的原因有电泳迁移和电渗迁移两个：（1）电泳迁移：在高压电场下，带电离子向相反的方向移动。（2） 电渗迁移：当毛细管内充满缓冲溶液时，毛细管壁上的硅羟基发生解离，生成氢离子溶解在溶液中，这样就使毛细管壁带上负电荷与溶液形成双电层，在毛细管的两端加上直流电场后，带正电的溶液就会整体的向负极端移动，这就形成了电渗迁移。二、电渗现象电渗流概念：当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层，二者之间存在电位差。CE所用的石英毛细管柱，在pH3时，石英毛细管壁上的硅醇基(— SiOH）在水溶液中发生电离，产生的SiOˉ负离子使毛细管壁内表面带负电，和溶液接触时相应的缓冲液带正电，形成了双电层。（如右图所示）当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electro osmotic flow ，简称EOF）。 高效毛细管电泳中影响电渗流的因素有以下几个方面：1.电场强度的影响：电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。2.毛细管材料的影响：不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同；3. 电解质溶液性质的影响：（1）溶液pH的影响：对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大； pH3，完全被氢离子中和，表面电中性，电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。（2）阴离子的影响：在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同；缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液黏度和工作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加，电渗流下降。4. 温度的影响：毛细管内温度的升高，使溶液的黏度下降，电渗流增大。温度变化来自于“焦耳热”；5. 添加剂的影响（1）加入浓度较大的中性盐，如K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液的黏度增大，电渗流减小。（2）加入表面活性剂，可改变电渗流的大小和方向；（3）加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。（4）加入阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁表面负电荷增加，zeta电势增大，电渗流增大；（5）加入有机溶剂如甲醇、乙腈，使电渗流增大。电渗流流形：电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）；液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。三、迁移速率（1）粒子在电解质溶液中的迁移速度等于电泳和电渗流两种速度的矢量和；正离子的运动方向和电渗流一致，故最先流出；中性粒子的电泳速度为0，