合成对HIV-1基因启动子TATA区具有识别功能的寡聚酰胺.pdfVIP

合成对HIV-1 基因启动子TATA 区具有识别功能的寡 聚酰胺1 裴云鹏，袁谷* 北京大学化学学院生物有机与分子工程教育部重点实验室，北京（100871 ） E-mail ：guyuan@ 摘 要：利用HBTU/HOBT 缩合剂，成功的合成了对HIV-1 病毒基因启动子TATA-BOX 具 有识别功能的吡咯类寡聚酰胺。在研究中发现 HBTU/HOBT 缩合剂的效率在寡聚酰胺的合 成中比DCC/HOBT 缩合剂高，是更高效合成寡聚酰胺的缩合剂。 关键词：寡聚酰胺，HIV-1 基因，TATA-BOX 1．前言 寡聚酰胺是一类能够穿透细胞膜, 调控基因表达的新型 DNA 识别分子，由于其特异性 识别及强结合的功能，使得寡聚酰胺在分子生物学，分子医学等方面具有广泛的应用前景， 故此类分子成为众多与基因领域相关研究学者关注的焦点之一。1 HIV-1 病毒导致的疾病已成为人类致命杀手之一，对人类健康的危害极大。 目前抗 HIV-1 药物普遍存在严重的抗药性及毒性. 因此寻找新的靶点, 研究新型抗 HIV-1 药物已成 为该领域的重点。 HIV-1 病毒基因启动子在基因转录和表达过程中发挥重要的作用，如果 能使用小分子识别，并结合启动子的碱基序列, 就有可能抑制基因的转录与表达, 控制病毒 的增殖。因此探讨小分子特异性识别HIV-1 基因启动子 TATA-box 的碱基序列具有重要的理 论和应用意义。 本研究选择 HIV 病毒基因启动子区 5’-CTGCATATAAGCAG-3’序列中 ATATAA 作为 研究靶点,2 依据寡聚酰胺与 DNA 碱基对的识别规则，设计了吡咯类的寡聚酰胺识别分子 （PyPyPyPyγPyPyPyPyβOEt ）。在我们研究组发展的液相法合成寡聚酰胺的基础上,3 选用 HBTU/DCC 为缩合剂，高产率的合成了对 HIV-1 病毒基因启动子区 TATA-BOX 具有识别功 能的新型吡咯类寡聚酰胺。 2 ．试剂及仪器 甲醇，乙醇，三乙胺，乙酸乙酯，氯仿，乙醚，乙酸酐均为北京化工厂分析纯级，NaH 为北京化工厂分装（50%含量）。HOBT,DCC ，β-丙氨酸，γ-丁氨酸,N- 甲基吡咯购自Acros 公司（分析纯），氘代氯仿购自 Alfa 公司（分析纯），Pd/C 购自 Aldrich 。 ESI 质谱由 Thermo Finnigan 公司的 LCQ DECA XP plus 质谱仪测定。NMR 谱使用 Varian200M 核磁共振仪测定。 3 ．实验部分 3.1 吡咯衍生物的合成 N- 甲基-2-三氯乙酰氯吡咯的合成 在 N2 保护下将等摩尔的 N- 甲基吡咯和三氯乙酰氯分别用5-6 倍体积的乙醚稀释，然后 1 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金的资助。 - 1 - 将前者缓慢滴加入后者，室温搅拌过夜。以饱和 K CO 溶液至 PH ＝6 左右，乙醚萃取，依 2 3 次水，饱和食盐水洗，无水 NaSO4 干燥，过滤，旋蒸得白色或浅黄色固体 N- 甲基-2-三氯乙 酰氯吡咯，产率 76%-93% 。 4-硝基-N- 甲基-2-三氯乙酰氯吡咯的合成 将 N- 甲基-2-三氯乙酰氯吡咯与乙酸酐充分混合，干冰降温至-40.0℃以下，再将约 3eq 的发烟硝酸缓慢滴加入体系，自然升温至室温，搅拌过夜。然后将体系冷却至-30.0℃，加 入冷的异丙醇，低温下充分搅拌混合后过滤，以冷的异丙醇洗涤，得白色晶体 4-硝基-N- 甲 基-2-三氯乙酰氯吡咯，产率 46%-68% 。 N- 甲基吡咯-2- 甲酸甲酯和4-硝基-N- 甲基吡咯-2- 甲酸乙酯的合成 将 4-硝基-N- 甲基-2-三氯乙