实时荧光定量PCR技术综述.pdfVIP

维普资讯 生物技术通报 · 技 术 与 方 法 - BIoTEcHNoLoGY BULLETIN 20o7年第 5期 实时荧光定量PCR技术综述 邓文星 张映 (山西农业大学动物科技学院，太谷 030801) 摘 要 ： 实时荧光定量PCR技术是在 PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。与传统PCR相 比．实时定量PCR能够更加快速、灵敏，并有效地对核酸进行定量检测。 关键词 ： 实时荧光定量PCR 标准曲线 A Review onReal—timeQ—PCR Technology Deng W enxing Zhang Ying (CollegeofAnimalScienceandTechnology，Shar~iAgricultureUniversity，Taigu030801) Abstract： TheRea1．．timeQ—-PCR technologyisonekindofhighlysensitivequantitativetechniqueaboutnucleic acid，which developsin thePCR techniquebaseCompared tlltradidonalPCR，Real-timeQ-PCR canbefasterly， sensitively．and effectively caIlbeappfiedni thequantiattivedetection ofnucleicacid， Keywords： Real一~ITIeQ—PCR Standardcurve 聚合酶链反应 (polymerasechainreaction，PCR) 理过程。(2)荧光信号通过荧光染料嵌入双链 DNA， 技术是 1985年开始 出现的一项基 因检测技术 。由 或荧光探针特异结合 目的检测物等方法获得 ，大大 于 PCR技术简便易行 、灵敏度高等优点 ，该技术被 提高了检测的灵敏度、特异性和精确性 4[,51。Rea1． 广泛应用于基础研究 ，成为分子生物学必不可少 的 timQ．PCR可 以应用于 mRNA表达 的研究 、DNA拷 研究工具。由于传统 的PCR技术存在 ，不能准确定 贝数 的检测 、单核苷酸多态性 的测定 、细胞 因子 的 量 。且操作过程 中易污染而使得假 阳性率高等缺 表达分析、肿瘤耐药基 因表达的研究以及病毒感染 点，使其应用受到局限。对 PCR产物进行准确定量 的定量监测。 成为PCR技术发展的重要方向 1。定量 PCR(qua 1 实时荧光定量 PCR技术的基本原理 ntitativePCR，Q．PCR)先后出现了多种方法 ，目前为 在 PCR反应体系 中加入荧光染料或荧光基 止 。其 中结果最为可靠 的就是实时荧光定量 PCR 团，这些荧光物质有其特定的波长 。仪器可以 自动 (RealtimefluorescentquantitativePCR，Real-timeQ— 检出，利用荧光信号积累 ，实时监测整个 PCR进 PCR)。 程 ，在 PCR循环中，测量的信号将作为荧光 阈值的 1996年 。实时荧光定量PCR技术由美 国Applied 坐标。并且引入一个——Ct值 (Thresholdcycle)概 Biosystems公司首先推出。这项技术是指在 PCR反 念 ，Ct值是指产生可被检测到的荧光信号所需的最 应体系中加入荧光染料或荧光基 团，利用荧