APE1特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及其在人肝癌MHCC97-H细胞中APE1基因沉默效应的观察.pdfVIP

APEl特异性s诹NA慢病毒表达载体的构建及其 在人肝癌MHCC97．H细胞中APEl基因沉默效应的观察 中文摘要 目的 学检测分析，为进一步探讨APEl在肝癌侵袭和转移中的作用机制提供理论基础 和实验依据。 方法 设计4对干扰靶序列，分别与pGCSIL．GFP载体连接、转化、并测序鉴定， 将重组质粒命名为KDl～KD4。通过Westernblot筛选最有效的靶点，将筛选到 的重组质粒与pHelper 并测定其病毒滴度。将包装产生的慢病毒颗粒感染MHCC97．H细胞，通过RT- PCR和Western blot检测其干扰效率，通过免疫细胞化学观察APEl表达的定位 周期变化；应用体外黏附实验观察APEl基因抑制前后MHCC97．H细胞黏附能 的趋化运动能力和侵袭能力的变化。 结果 1．通过PCR筛选阳性克隆和DNA测序鉴定，与设计的序列一致，通过West． em 2．0 1．0，pHelper b