苜蓿耐羟脯氨酸变异体的筛选及抗性研究.pdfVIP

试验研究 811 提高了树脂磷、NaOH磷含量，而超声磷含量降低；就总体而言，易于作物吸收的无机磷(如树脂磷 和NaHCO。磷)含量有所升高。胡锋的研究发现在稻麦轮作系统中，无论采用何种秸秆施用方式，蚯 蚓活动均能显著提高土壤微生物量碳含量(pO．05)。秸秆的施用会减弱同年内土壤微生物量碳在麦 季成熟期高于稻季的趋势，而蚯蚓的作用使该差异变得更显著(po．05)。另外，易现峰对10个不 物的比例在40．1％和99．4oA之间波动，蚯蚓的取食生态受到土地上C3／C4作物轮作模式的影响，C4 作物轮作频率与蚯蚓稳定性碳同位素比值之间呈正相关。这说明蚯蚓的稳定性碳同位素比值可较客观 地反映出耕作制度和轮作模式。 蚯蚓是一种对农业生态系统有重要影响的大型土壤动物，加强蚯蚓研究可对农业生态系统功能发 挥起到一定的促进作用。但是，土壤本身的复杂性、人们对蚯蚓自然历史和生物地理学知识的缺乏、 野外控制蚯蚓群落大小方法的滞后等都限制了蚯蚓研究的发展。其他新技术如碳氮同位素分析，分子 生物学技术和图像分析技术等的应用将有助于蚯蚓生态功能的研究。纵观以往的研究发现，人们对蚯 蚓在生态系统中的作用研究多集中在农业生态系统，而其在草原、森林和具有过度性质的农牧交错带 生境中的作用鲜有报道，因此，蚯蚓在生态系统中的作用研究仍具有广阔的前景和重要的意义。 苜蓿耐羟脯氨酸变异体的筛选及抗性研究@ 李红1，李波2，王丽玲2，扬伟光1 (黑龙江省畜牧研究所，黑龙江，齐齐哈尔1610001) (齐齐哈尔大学生命科学与工程学院，黑龙江齐齐哈尔1610062) 随着畜牧业的发展和天然及人工草场复壮或更新的需要，人们更加关心牧草的品质及其对抗环境 变化的适应能力。作为“牧草之王”的苜蓿，在世界范围内具有悠久的栽培历史，在改善生态环境， 解决当地优质饲草缺乏等方面起着重要的作用。 我国西北幅员辽阔，干旱缺水，生态环境较为脆弱，而我国北方冬季漫长寒冷，气温较低的地区 全年无霜期多在90一120d，因此研究紫花苜蓿的抗逆性(抗旱、抗寒等)一直是人们关注的首要问题。 本实验利用组织培养技术对苜蓿愈伤组织进行叠氮化钠诱变及抗L—Hyp筛选，进而进行定向筛选获 得抗性强的苜蓿愈伤组织，为人们进行抗逆性育种提供基础。 一、材料和方法 (一)材料 本实验以紫花苜蓿敖汉和龙牧801种子作为材料，由黑龙江省畜牧研究所提供。 (二)方法 1．无菌苗的培育 。 基金项目：黑龙江省“十一五”农业重点科技攻关项目：优质牧草新品种选育及生产配套技术研究 (GB068109) 作者简介：李红(1960一)，女，研究员，主要从事牧草育种与栽培、草原改良治理等研究。 联系方式：hljlihong@163．corn 812 2009中国草原发展论坛论文集 分别选取粒籽粒饱满、有光泽的紫花苜蓿龙牧801和敖汉种子，50℃水浴浸泡lh，然后在无菌室 4—5次，在无菌室中将其接种到MS基本培养基中，再放到培养室中培养，在漫射光下培养，一周后 便可以得到无菌苗。 2．愈伤组织诱导及扩大培养 上)，25℃培养箱培养20d，共继代两次。 3．愈伤组织对L—Hyp的反应试验 分别取两种苜蓿正常愈伤组织分割成d一0．5cm的均匀小块，分别转入含有0、4、8、10、 16mmol／L 筛选的全致死剂量，和半致死剂量。 4．愈伤组织诱变及筛选 8 Hyp 8mmol／L条件下继续培养。 5．游离脯氨酸含量的测定 采用磺基水杨酸一酸性茚三酮法对诱变处理和未经处理的苜蓿愈伤组织的脯氨酸的含量进行了测 定，各处理重复三次。 6．可溶性糖含量的测定 采用张志良的方法对诱变处理和未处理的愈伤组织进行POD活性的测定，各处理重复三次。 7．POD酶活性的测定 采用张志良的方法对诱变处理和未处理的愈伤组织进行POD活性的测定，各处理重复三次。 8．抗性细胞系对PEG和低温的胁迫反应 活率。 将龙牧801苜蓿的对照和诱变的愈伤组织分割成d=0．5cm的均匀小块，接种于普通培养基上，然 后进行低温胁迫，设置8℃、4℃、O℃、一4℃、一8℃五个温度梯度每个梯度培养10d，取出后室温下 培养，