海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠(ACA)液芯微胶囊制备工艺优化及性能研究.pdfVIP

摘要 海藻酸盐／壳聚糖固芯微胶囊在生物细胞发酵领域虽然具有显著的优势，但仍存在一 些不足：由于微胶囊内是固芯三维网状结构，使得细胞生长空间位阻较大，影响了细胞 的大量增殖，同时固芯造成分子传质阻力大，微胶囊中心区域细胞不能及时获得营养物 质和排出代谢产物，致使微囊化细胞生长和生产能力下降。针对这些不足，本文采用柠 檬酸钠液化微胶囊的固芯，制得海藻酸钠／壳聚糖／海藻酸钠(ACA)液芯微胶囊。首先采 用响应面优化法对液芯微胶囊的制备工艺条件进行优化，寻找制备具有较好机械强度的 液芯微胶囊的工艺条件；然后考察液芯微胶囊的传质性能包括小分子物质通过膜的传质 系数和微胶囊膜的截留分子量；最后对细胞进行微囊化培养，考察ACA液芯微囊化细 胞的生长和代谢情况。旨在为ACA液芯微囊化技术在细胞发酵培养领域的应用奠定理 论与实践基础。 主要结论如下： 1．对成膜材料壳聚糖进行改性，目的是提高壳聚糖的脱乙酰度和降低壳聚糖分子 量。采用醇溶剂法制得具有高脱乙酰度(90％)的壳聚糖，采用NaN02氧化法降解高分 子量壳聚糖制得一定低分子量范围的壳聚糖。 2．通过单因素实验确定制备ACA液芯微胶囊的工艺条件范围：壳聚糖脱乙酰度 成膜反应时间15 min。 min一-30min，柠檬酸钠的pH6．5，液化时间20 3．在单因素实验基础上，用膨胀率(sw)来表征液芯微胶囊膜的机械强度，采用 响应面优化法对ACA液芯微胶囊制备过程中11个因子进行优化实验，寻找显著影响因 值和柠檬酸钠pH值是影响ACA液芯微胶囊膜强度的三个显著因子；然后由最陡爬坡 实验逼近响应值最大的中心区域，确定中心点的条件为：壳聚糖浓度为5．5叽，壳聚糖 溶液pH为6．2，柠檬酸钠pH为6．O；最后由最陡爬坡实验的中心点设计中心组合实验， 建立模型，绘制响应面曲线，计算最优化的制备条件为：壳聚糖浓度5．9虮，壳聚糖溶 液pH为6．22，柠檬酸钠pH为5．53。进行验证实验，实验结果与优化理论值相符。 4．在优化条件的基础上制备ACA液芯微胶囊，考察液芯微胶囊的传质性能。首先 建立传质模型，考察4种小分子底物(谷氨酸、L．苯丙氨酸、葡萄糖和乳糖)通过微胶 囊膜的传质系数，通过实验数据拟合得到谷氨酸、L广苯丙氨酸、葡萄糖和乳糖的传质系 为模型分子确定液芯微胶囊膜的截留分子量为2000。 5．在优化条件的基础上制备ACA液芯微胶囊并包埋大肠杆菌和酿酒酵母细胞，考 察ACA液芯微囊化细胞的生长和代谢情况。首先比较了大肠杆菌和酿酒酵母细胞在 ACA液芯微胶囊内和固芯微胶囊内的生长情况，其次考察了液芯微囊化酿酒酵母细胞 的代谢和多批次培养情况。实验结果证明大肠杆菌和酿酒酵母细胞在液芯微胶囊内的生 长情况良好，细胞密度比固芯微胶囊大；液芯微胶囊化酿酒酵母细胞代谢产物(酒精) 浓度维持稳定，对细胞进行多批次培养，液芯微胶囊形态完好，细胞生长代谢维持稳定。 关键词 海藻酸钠／壳聚糖／海藻酸钠微胶囊，液芯，优化，响应面，传质系数，新陈代谢 Abstract solidcore has in AlthoughAlginate／ChitosanMicrocapsulesignificantadvantages cellfermentationbutthere ofthe arestillsomedeficiencies：Asthe aspectsbiological capsule hasasolidcorewithinthethree·dimensionalnetwork cellsmoresteric structure，making a numberofcell masstransfer