高特异性人血清白蛋白化学发光免疫分析方法的建立.pdfVIP

第 53卷 第 3期 厦 门大学学报 (自然科学版) Vo1．53 NO．3 2014年 5月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) M ay 2O14 高特异性人血清 白蛋 白化学发光免疫分析方法的建立 张雅丽，袁伦志，王腾云，刘 旋 ，吴 坤 ，张 军，程 通 ，夏宁邵 (厦 门大学 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，生命科学学院，福建 厦门 361102) 摘要 ：人血清白蛋白(HSA)是人类肝脏功能的重要生物标志物．本研究旨在发展一种具有高度种属特异性和灵敏度 的HSA化学发光免疫分析 (HSA—CLIA)定量检测方法．通过HSA免疫小鼠，制备了6株HSA 鼠单克隆抗体 ；使用间 接化学发光检测 (Indirect-CLIA)和 Westblotting检测方法评价单抗对 HSA 的反应活性 ；使用免疫组织化学检测 (IHC)和 Westblotting检测方法评价单抗的种属特异性 ；选择最佳的包被抗体和检测抗体配对 ；确定 HSA—CLIA的定 量线性和范 围．Westbloting和 IHC方法 中，4F5和 5D2抗体反应性最强 ，且不与小 鼠、大 鼠、牛 、兔 、山羊 、猴 、鸡等常见 实验动物血清 白蛋 白交叉反应．以单抗 5D2配合单抗 4F5建立 的 HSA—CLIA，线性范 围达到 122～31250pg／mL，可 适用于多种样本 的 HSA定量检测．本研究发展 的单克 隆抗体和检测方法为 HSA 的特异性检测提供 了重要工具 和 手段 ． 关键词 ：人血清白蛋白(HSA)；单克隆抗体；种属特异性；化学发光免疫分析(CLIA) 中图分类号 ：Q819 文献标志码 ：A 文章编号 2014)03—042406 人血清 白蛋 白(humanserum albumin，HSA)是 一 种单链无糖基化的蛋 白质，由585个氨基酸残基组 1 材料与方法 成 ，分子质量为 66．5kuI1]．HSA 由肝脏合成分泌 ，是 循环系统中的重要蛋 白，主要生理功能包括维持人体 1．1 试 剂 渗透压和血液 总蛋白水平、运载亲水小分子、消除 自 HSA标准品及纯化蛋 白、显色 底物、CIIA相关 由基 、抗凝血 、抗击炎症和感染等I2。]．HSA 是肝脏功 试剂由北京万泰生物药业有限公司惠赠；弗 氏完全佐 能的重要生物标志物 ，建立高特异性和高灵敏度 的 剂、辣根过氧化物酶 (HRP)干粉购 于 Sigma公司； HSA 检测方法具有重要 的应用价值和意义．当前 ， DMEM 培养基干粉 、1640培养基干粉、胎牛血清等细 HSA的检测方法主要有分光光度法[4]、荧光光度 胞培养相关试剂均购于 GIBCO公司；免疫组化超敏 法 、极谱法 引、酶联免疫吸附法 等．化学发光免疫 试剂盒购于福州迈新公司；碱性磷酸酶 (AKP)、HRP 分析方 法 (chemiluminescenceimmunoassay，CIIA) 标记 的羊抗 鼠 (goat-anti—mouse，GAM)二抗购 于 是近年来发展起来的新一代免疫检测技术，相 比传统 PIERCE公司 ；商品化 HSA 山羊多抗 (goatantiHSA 的检测方法具有灵敏度高、线性动力学范围宽广、光 polyclonalantibody)购于 Abeam公司 ；其他常规生化 信号持续时 间长等一系列的优势_g ．目前 已有一些 药品试剂购于国药集团化学试剂有 限公司 ；小 鼠血清 关于 HSA 的化