禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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2017-09-03 发布于安徽
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英文缩略词表 ^● ● 鼍 ^ ● - 咎● ■ 卜目录中文摘要…………．．：…………………………………1 Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2 1引言……………………………………………．．4 1．1戊型肝炎的概况……………………………………．．4 1．1．1戊型肝炎病毒的病原学………………………………4 1-1．2戊型肝炎病毒的基因组结构…………………………．．5 1-1．3病毒的宿主范围与宿主………………………………6 1．1．4戊型肝炎的流行病学………………………………．．7 1．1．5检测方法………………………………………．．11 1．1．6疫苗的研制………………………………………12 1．2禽戊型肝炎病毒的研究进展……………………………14 1．2．1禽戊型肝炎病毒病原学……………………………．．14 1．2．2禽HEV肝炎病毒流行病学研究状况……………………．15 1．2．3禽戊型肝炎病毒免疫学的研究状况……………………．15 1．3本研究的目的与意义…………………………………20 2材料与方法…………………………………………23 2．1材料……………………………………………23 2．1．1菌株和质粒………………………………………23 2．1．2载体……………………………………………23 2．1．3实验动物及病毒株…………………………………24 2．1．4工具酶和主要试剂…………………………………24 2．1．5主要仪器……………j…………………………．25 2．1．6溶液的配制………………………………………25 2．2方法……………………………………………．．29 2．2．1禽HEV ORF2．1重组质粒的鉴定……………………．．29 2．2．2禽HEVORF2．1蛋白的表达和纯化……………………31 2．2．3禽HEV ORF2s蛋白的设计、构建、表达、鉴定和纯化………．34 2．2．4小鼠的免疫………………………………………36 2．2．5免疫小鼠抗体效价的测定……………………………37 2．2．6单克隆抗体的制备…………………………．：…．．。．38 2．2．7单克隆抗体的鉴定…………………………………41 3结果与分析…………………………………………46 3．1禽HEVORF2．1重组质粒的鉴定………………………．．46 3．1．1重组质粒禽HEVORF2．1的酶切鉴定…………………．．46 3．1．2重组质粒禽HEVORF2．1基因测序……………………．46 3．2禽HEVORF2．1蛋白的表达与鉴定………………………47 3．2．1禽HEVORF2．1蛋白的表达…………………………．47 3．2．2禽HEVORF2．1蛋白的Westernblot鉴定………………．．48 3．3禽HEVORF2s蛋白的设计…………………………．．49 3．3．1禽HEV0RF2—1蛋白的分析……………………………49 3．3．2禽HEVORF2s引物的设计…………………………．．49 3．4禽HEVORF2s蛋白的纯化和鉴定………………………50 3．4．1禽HEVORF2s蛋白纯化……………………………．50 3．4．2禽HEVORF2s纯化蛋白的鉴定………………………．51 3．5免疫小鼠抗体效价的测定…………………………．5l EVORF 3．6抗禽H 2．1蛋白特异性单克隆抗体细胞的筛选………………………………．．：………………．．52 3．7单抗腹水的制备与纯化………………………………．52 3．7．1单抗腹水的