多肽自组装膜用于凝血酶的检测 Application of Peptide Self-assembled Multilayers on Detection of Thrombin.pdfVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第7 期 2014 年7 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1044 ~1048 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140136 多肽自组装膜用于凝血酶的检测 李淑淳 李 芳 刘 斌 孙向英* (华侨大学材料科学与工程学院,厦门361021) 摘 要 利用自组装膜技术在石英片表面构建了多肽自组装膜。 考察了组装液浓度和组装时间对多肽自组 装膜组装效果的影响,并用紫外可见吸收光谱仪和扫描电镜对该膜进行了表征。 研究结果表明,当γ-氨基丙 -4 基三乙氧基硅烷水溶液浓度为1% (V/ V),组装时间为3h;金纳米浓度为2.4 × 10 mol/ L,组装时间为12 h; -4 多肽浓度为1× 10 mol/ L,组装时间为12h时,组装效果最好。 基于凝血酶可特异性酶切多肽中精氨酸和甘 -12 氨酸之间的肽键,建立了一种测定微量凝血酶的新方法,方法的线性响应范围为 2. 8×10 ~9.9× -10 -12 10 mol/ L,检出限为1.4×10 mol/ L。 此膜用于血清样品中凝血酶的测定,回收率为91.6% ~107.6%。 关键词 多肽; 自组装膜;凝血酶;荧光;金纳米 1 引 言 [1] 凝血酶在血液凝固、炎症、贫血、创伤愈合等生理及病理过程中发挥着重要作用 ,因此对其检测 [2] [3] 具有重要意义。 目前,许多方法已成功地应用于凝血酶的检测,包括化学发光法 、荧光法 、光度 [4] 法 等,然而这些方法多采用核酸适配子作为识别单元,需要在核酸适配子上修饰信号分子,使得这些 方法比较复杂,且成本较高,并且大多是在纯液相中检测。 自组装膜(SAMs)是分子通过化学键相互作用自发吸附在固-液或气-固界面而形成的热力学稳定 和能量最低的有序膜。 由于其具有结构简单、膜均一稳定以及制备相对容易等特点而备受关注[5~8]。 多肽可以通过自组装膜技术固定到多种基质上,并且可以用于实时动态监测相关蛋白酶的活性[9~12]。 将自组装膜技术引入到实时监测蛋白酶活性的传感器中,拓宽了其研究和应用的范围。 本研究设计一端为有荧光特性的色氨酸残基,另一端含有一个半胱氨酸残基且具有凝血酶酶切位 点的多肽(Peptide),通过 Au S 键的作用将多肽组装到 Quartz/ APES/ AuNP SAMs 上,制得 Quartz/ APES/ AuNP/ Peptide复合薄膜。 利用金纳米能显著猝灭Peptide SAMs 上色氨酸的荧光,而加入凝血酶 后,凝血酶能特异性酶切多肽中甘氨酸和精氨酸之间的肽键[9,11] ,从而使色氨酸残基从自组装膜表面脱 落进入溶液,自组装膜上金纳米与色氨酸距离的增大导致色氨酸荧光恢复(原理见图1),由此建立了一 种多肽自组装膜检测凝血酶的新方法。 与文献报道的方法相比,本方法具有以下优势: