激发子PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡早期上调表达基因片段的分析.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(8):2302-2309 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.012 激发子PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡 早期上调表达基因片段的分析 甘芸哲，张正光，王源超，郑小波 （南京农业大学植物保护学院/农业部病虫监测与治理重点开放实验室，南京 210095 ） 摘要： 【目的】从基因组水平筛选不结球白菜中受激发子 PB90 诱导过敏性细胞死亡早期上调表达的基因。 【方法】采用抑制性差减杂交的方法筛选疫霉菌激发子PB90注射处理不结球白菜叶片5 h内上调表达的基因。【结 果】测定分析了 200 个上调表达的 cDNA 片段，生物信息学分析表明它们包含 70 个上调表达的基因片段，共分为 9 类：基本能量或代谢产物；蛋白质合成分解；细胞信号传导；细胞凋亡；转录；运输相关和编码未知功能的蛋 白等。进一步用半定量RT-PCR分析了候选基因beclin，thioredoxin，HLA-B，MAP3K，SPT1， SPT2 和 AGO1，表 明这 7 个基因在 PB90 诱导不结球白菜过敏性细胞死亡早期上调表达。【结论】构建了疫霉菌激发子 PB90 诱导不 结球白菜过敏性细胞死亡早期抑制性差减杂交 cDNA 文库，获得了 70 个上调表达的基因，并对其中 7 个基因的可 能功能进行预测分析，认为这些基因可能与疫霉菌激发子PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡有关。这些基因的 挖掘为进一步阐明过敏性细胞死亡的分子机制提供了素材。 关键词：PB90；不结球白菜；抑制性差减杂交；上调；过敏反应 Analysis of Non-Heading Chinese Cabbage Gene Fragements Up-Regulated in Early Response to Elicitor PB90 GAN Yun-zhe, ZHANG Zheng-guang, WANG Yuan-chao, ZHENG Xiao-bo (Key Lab of Monitoring and Management of Plant Disease and Insects of Chinese Ministry of Agriculture, College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) Abstract: 【Objective 】An experiment was conducted to identify non-heading Chinese cabbage genes up-regulated in early response to elicitor PB90. 【Method 】A suppression subtractive library-based approach was used to isolate the plant’s expressed sequence taqs (ESTs) up-regulated in the early induction/execution of the hypersensitive response (HR) induced by elicitor PB90 from Phytophthora boehmeriae . 【Result 】Two hundred clones which up-regulated in early response to elicitor PB90 were analyzed. According to their putative identification in BLAST searches