马氏珠母贝血液与外套膜外液细胞学和转录组学比较.pdfVIP

马氏珠母贝血液与外套膜外液细胞学和转录组学比较 摘 要 本文利用光镜及电镜技术对马氏珠母贝（Pinctada martensii ）的血液细胞和外套 膜外液细胞进行分类研究，并分别构建了这两种细胞的转录组文库，运用RNA 高通 量测序（RNA-seq ）技术对构建的文库开展测序和生物信息学分析。 根据细胞的形态结构特征将马氏珠母贝的血液细胞分为四类：淋巴样细胞、大颗 粒细胞、小颗粒细胞和透明细胞。淋巴样细胞约占细胞总数的24.7% ，细胞平均大小 为4.13 μm，胞质中无颗粒。大颗粒细胞约占细胞总数的25% ，细胞平均大小为6.40 μm ，内含多个瑞氏-姬姆萨染色呈蓝紫色的颗粒物质。小颗粒细胞约占细胞总数的 3.7%，细胞平均大小为4.35 μm，细胞质中充满颗粒物质，瑞氏-姬姆萨染色反应为鲜 红色。透明细胞约占细胞总数的46.6% ，细胞核平均大小2.67 μm，细胞中没有颗粒 物质。血液细胞透射电子显微镜观察显示：淋巴样细胞中发现有少量线粒体和小空泡 存在，细胞质较均一；大颗粒细胞线粒体较多，小空泡密集，有电子密度高的颗粒存 在，内质网及核糖体丰富；小颗粒细胞细胞内有小空泡、中型空泡和高电子密度的小 颗粒；透明细胞小空泡很少，但有大空泡存在，没有发现高电子密度的颗粒。 根据细胞的形态结构特征将马氏珠母贝的外套膜外液细胞分为五类：淋巴样细 胞、大颗粒细胞、小颗粒细胞、透明细胞和巨型细胞。淋巴样细胞约占细胞总数的 18.8%，细胞平均大小为4.10μm，胞质中没有颗粒物质。大颗粒细胞约占细胞总数的 19.0%，细胞平均大小为 6.44μm，颗粒物质密集，瑞氏-姬姆萨染色呈蓝紫色。小颗 粒细胞约占细胞总数的4.4%，细胞平均大小为4.33μm，细胞中颗粒染色呈鲜红色。 透明细胞约占细胞总数的 24.1%，细胞平均大小为 6.08μm，胞质中没有颗粒。巨型 细胞约占细胞总数的 33.7%，细胞平均大小为 11.09μm，HE 染色发现细胞内有大量 嗜伊红颗粒物质。外液细胞透射电子显微镜观察显示：淋巴样细胞没有发现电子密度 高的颗粒，有小空泡存在；大颗粒细胞线粒体较多，小空泡密集，还有电子密度高的 颗粒存在；小颗粒细胞内有小空泡以及高电子密度的小颗粒；透明细胞细胞有时发现 有分页核存在，有大空泡存在，细胞质均匀；巨型细胞内空泡及颗粒物质密集，且能 以出芽方式分泌囊泡。 鉴于血液细胞与外液细胞在形态上的相似性，推测外液细胞中部分细胞（淋巴样 细胞、大颗粒细胞、小颗粒细胞、透明细胞）可能由血液细胞穿越外套膜而到达外液 腔。 对马氏珠母贝血液细胞和外液细胞转录组测序并对差异表达的基因进行筛选，筛 选出9994 条差异表达明显的基因；通过对9994 个差异表达基因进行GO 功能显著性 富集分析和 KEGG pathway 富集通路分析。在血液细胞中显著富集的KEGG 通路和 GO 通路中大多与外界刺激下血细胞的迁移活动相关，说明血液细胞在应激反应方面 I 起着重要的作用。在外液细胞中发现大量高表达的矿化基因，推测外液细胞可能参与 了贝壳的矿化过程。 通过对马氏珠母贝的血液细胞和外液细胞进行比较来研究外液细胞的来源和功 能，为后续对马氏珠母贝珍珠质形成的矿化研究提供数据资料。 关键词：马氏珠母贝，血细胞，外液细胞，分类，转录组 II Comparison of hemolymph and extrapallial fluid on cytology and transcriptome in Pinctada martensii Abstract Optical and transmission electron microscopical studies were carried out to characterize the haemocytes and extrapallial fluid cell of the pearl oyster Pinctada martensii . And transcriptome libraries