空间环境诱发小麦突变体的TILLING分析.pdfVIP

摘要 TILLING技术目前已成功应用于植物化学诱变群体突变位点筛选并取得了良好的研究进展。 本研究旨在探索TILLING在小麦空间环境诱变群体中应用的可行性。以冬小麦品种新麦18空间 I酶切的高通量TILLING筛选体系，检测小麦 诱变SP2代群体为试验材料，探索建立基于CEL 品质、抗逆及抗病等性状相关的目标基冈片段，并结合PCR技术检测小麦Lr34基因大片段缺失 突变。主要研究结果如下： I I酶切的高通量 缓冲液、提高空气相对湿度至40％等，在小麦中建立起了稳定的基T-CEL TILLING技术检测平台。 Kb与 基因与小麦A基因组上的DREBl基因片段中检N-N了突变位点，突变频率分别为1／3073 1／1713 Kb；另外3个目标片段没有检测到等位变异位点。Pinb基因中检测到1个突变体P679， 为碱基A缺失突变，经表型鉴定后发现，该缺失突变引起了突变体P679的种子硬度提高；在A 除了发生T碱基缺失同时产生碱基T到碱基C的转换，均导致了蛋白编码的提前终止。 3、在新麦18 突变验证结果表明，在相同的PCR扩增及检测条件下，新麦18野生型样本均能扩增出目的基因 片段，而突变样本不能扩增出目的条带，缺失片段大小约为6Kb，突变频率为0．52％。 以上试验结果证实，TILLING技术可以应用于空间诱变群体突变检测。空间诱变群体点突变 频率总体上低于EMS化学诱变，PCR技术检测大片段缺失突变结果表明，空间诱变群体中片段 缺失突变频率相对较高，且空间诱变可引起大片段缺失突变。 关键词：小麦，空间诱变，TILLING，点突变，片段缺失 Abstract TILLINGhasbeen inchemical—induced and on successfullyapplied plantpopulationgoodprogess ofmutationshave made．Thisaimsto the of screening been study explorefeasibility highthroughput TILLINGonwheat the ofwheat Xinmail8．The SP2populationvarity applying byusingspace—induced newallelesof CELI．basedTILLINGwillbeestabl the associated facility ished，and targetedgenes withwheat toleranceanddiseaseresistancewillbescreened．Thedeletionmutationsof quality,stress be onPCR mainresultswereas thewheatLr34 will alsoscreenedbased amplification．The genes following： thereactiontimeo