高效液相色谱在生物医药研究中应用第七讲生物胺分离和测定(上)――儿茶酚胺、5-羟基色胺及.pdfVIP

讲 座 高效液相色谱在生物医药研究中的应用 第七讲 生物胺的分离和测定 上（）— 儿茶酚胺、5-羟基色胺 及其代谢产物的分离和测定 唐琴梅 中（国科学院上海药物研究所，200031 生物胺是机体代谢反应过程中所产生的胺类化 CA和5-HT及其主要代谢产物的名称和结构，它们 合物，其中研究得较多的有两类：神经递质儿茶酚胺 的分离可采用阳离子交换色谱、反相色谱和反相离子 CA）和5-羟基色胺 5（-HT，以及多胺。CA和 5-HT 对色谱。 的功能与人们的健康和疾病有密切的关系，它们不仅 1．阳离子交换色谱 阳离子交换色谱是利用儿 直接参与行为活动如（运动功能、学习记忆等）以及参 茶酚胺的氨基进行离子交换，因此它主要用于儿茶酚 与血压、心率、呼吸和睡眠等植物神经功能的调控，还 胺的分离，也可用于分离带氨基的代谢产物1-5CA 与一些功能性疾病如精神分裂症、忧郁症以及器质性 的酸性代谢产物在阳离子交换柱上没有保留，因此它 病变 如（巴金森氏综合症、心血管性疾病等）的出现有 不能同时分离酸性和中性代谢产物。 关，某些肿瘤如神经母细胞瘤及嗜铬细胞也会导致 2．反相色谱 一般用于分离中性或非极性化合 C 的异常代谢。多胺则与细胞增殖有关，并发现肿 物，CA5-HT及其酸性代谢产物都是极性化合物，因 瘤病人尿液中的多胺含量增加，因此生物胺及其代谢 此在反相色谱中保留时间较短，容易受生物样本中非 产物的测定对疾病的诊断、治疗以及药物研究都有重 保留物的干扰。但CA在柱前荧光衍生时的荧光衍生 要意义。 产物极性大为降低，可以用反相色谱分离6-8。酸性 表7-1儿茶酚胺、5-HT及其主要代谢产物的名称及缩写名 代谢产物则可以通过调节流动相的pH改变其保留 值，在低pH时通过离子抑制作用延长其保留时 间9-13。所以反相色谱一般适合于CA的柱前荧光衍 生物及其代谢产物的测定。但也有通过梯度洗脱来 分离C、色氨酸及其代谢产物的报道4。 3．反相离子对色谱 这是 目前在CA5-HT及其 代谢产物的分离中应用最广的方法。在洗脱液中加 入离子对试剂，可以延长CA的保留时间，使保留时 间较短的NEE从非保留的干扰物中分离出来，而且 通过改变离子对试剂的浓度可以改变生物胺的保留 时间，以此来改善生物胺及其代谢物的分离，所以该 方法能同时分离生物样本中的生物胺及其代谢产物。 近年来由于HPLC技术的不断发展，用HPLC分 常用的离子对试剂有烷基硫酸钠15-18烷基磺 离测定体液和组织中生物胺的方法完善，检测灵敏度 酸钠 19-27，以及樟脑磺酸 钠（，CSA 28-31 樟脑磺酸 可达pmol水平。 是由徐修容等开发的用于儿茶酚胺分离的离子对试