斜纹夜蛾中肠胰凝乳蛋白酶基因(Slctlp1)的克隆、表达、定位及功能初步分析.pdf

． ，～，，‘j．一、，≠ ：zr．，一．．．．。 Zhan Qinglei AssociateProf．Lin Supervisor Liu／Prof．Qili Feng and Major Molecular Biochemistry Biology Schoole0fLife College： Sciences SubmittedDate 1 0 30，20 May lctlpJ)的克 分析 导师：刘琳副教授，冯启理教授 摘 要 丝氨酸蛋白酶广泛存在于鳞翅目昆虫中，在昆虫发育过程 中参与了各种生理活动，包括食物消化、营养吸收，血液凝固， litura) 免疫反应，信号转导等。我们从斜纹夜蛾(Spodoptera 六龄第三天幼虫的中肠EST文库中获得一个编码胰凝乳蛋白酶 sinlike protein)，克隆并分析了它的基因结构，组织定位，研究了它的 Jf的cDNA 发育和诱导表达，并进行了功能的初步鉴定。Slcttp 由l009个核苷酸组成，编码29 5个氨基酸的多肽，预测的分子 0．6 量为3 kDa，等电点为8．2 8。该基因编码的蛋白质具有昆虫 胰凝乳蛋白酶典型的结构特征，包括催化三联体，与底物特异性 结合的口袋和6个保守的半胱氨酸残基。和其他物种的核苷酸 序列比对分析发现，该基因和草地贪夜蛾的同源性最高，相似 性可达92％。Southern blot的结果表明，在斜纹夜蛾基因组中， 该基因具有多个拷贝数。分别以cDNA和基因组DNA为模板， 使用相同引物扩增出目的基因，并对PCR产物测序的结果分析， 摘要 发现该基因有5个外显子和4个内 和Westernblot检测发现，该基因 白质水平主要都在幼虫的中肠表达 而在蜕皮、预蛹和蛹期的表达量明 LCTLPl蛋白的分 白在表皮和脂肪体也有较低量的表达。分析S ABSTRACT Serine are existedin insects proteaseswidely lepidopteran andinvolyeinawide Of range