一类含左炔诺孕酮基团的钌络合物作为潜在抗癌特效药物的研究.docxVIP

一类含左炔诺孕酮基团的钌络合物作为潜在抗癌特效药物的研究???????? 近年来顺铂（cisplatin）的发现大大加速了以铂络合物为基础的抗癌药物研究。顺铂、卡铂等药物已广泛运用于临床，每年销售额高达2亿多美元。但铂络合物作为抗癌药物也具有明显的副作用，如：引起神经中毒、肾中毒，某些癌细胞会产生 (或固有)耐药性等。因此，急需开发出高效低毒的金属络合物来克服上述弊端。José Ruiz实验小组设计并合成了新型的钌（Ru）络合物，17-α-[2-phenylpyridyl-4-ethynyl] -19-nortestosterone (LEV-ppy)化合物1, 结构如图一) ，[Ru(η6-p-cymene)(LEV-ppy)Cl] (化合物2，结构如图一)和[Ru(η 6 -p-cymene)(ppy)Cl] (化合物3，结构如图一)。作者将合成后的产物分别用1 H ，13 C NMR和 ESI-MS做了分析，确定了化合物1-3的结构。图一 化合物1-3的结构??? 接着，为了分析这类钌化合物的抗癌特性，分别将化合物1-3、顺铂与人类乳腺癌细胞T47D、上皮性卵巢癌细胞A2780和A2780cisR结合，培养48小时后进行了细胞毒性分析。分别检测了这四种化合物的IC50值，相应的IC50值和抗阻系数（RF）见表一，从表中可以看出，化合物2的抗阻系数最低，说明该化合物比类似的钌络合物、顺铂等，更能有效对抗癌细胞获得的耐药性。??? 表一 在相同实验条件下将化合物1,2,3以及顺铂分别与人类乳腺癌细胞T47D和上皮性卵巢癌细胞A2780和A2780cisR进行结合后，得到的这四种化合物的IC50和RF值。??? 同时，作者采用了电泳迁移法考察化合物2对DNA超螺旋结构的影响，结果见图二。化合物2在共价闭环状态（CCC）和开环状态（OC）均能使DNA超螺旋结构发生改变，而其它对照组均未出现类似情况。图二 电泳迁移效果图。 1：pBR322; 2: pBR322+化合物1；3：pBR322+化合物2；4: pBR322+化合物3；5：pBR322+顺铂??? 因为化合物2能更加有效的对抗癌细胞获得的耐药性，所以进一步分析化合物2的化学性质具有重要意义。作者通过计算化合物2的结构来研究它的化学性质，作者采用Gaussian09软件，在密度泛函（DFT）水平上进行了结构优化和能量计算。计算的初始构型采用RuII(η6-p-cymene)(ppy)Cl的X-衍射结构，通过旋转该结构中的C-C≡C键来寻找能量最低的稳定构型，计算所得的最稳定构型见图三。在该结构中，亲脂性的甾体基团远离金属中心，Ru原子被四个不同供体原子（Do）包围。接着，作者用MBO和AIM理论分析了Ru-Do键的强度，分析表明Ru-arene键的强度最大，不易断裂；Ru- Cl键强最弱，易断裂。该计算说明了亲脂性的甾体基团远离金属中心；不稳定的Ru-Cl键中的Cl原子容易被其它基团取代。??图三 在B3LYP/def2-TZVPP水平下计算得到的化合物2的最稳定构象??? 最后，为了探究化合物2如何改变DNA超螺旋结构，即化合物2与DNA（以9-EtG为模型）的反应机理，作者使用Gaussian09软件在B3LYP/def2-TZVPP水平下进行计算。反应中，由于Ru-Cl键最易断裂，因此Cl被9-EtG取代，形成稳定的阳离子[Ru(η6-p-cymene)(LEV-ppy)-( 9-EtG)]+ (4+)。接着，Cl-与4+结合形成了稳定的化合物4+?Cl-（结构见图四）。在4+?Cl-的结构中，Cl-进入一个由甾体α面、苯基吡啶、鸟嘌呤包围的空间中，该空间中存在大量的非键作用（图四中由虚线表示），比如Cl-与苯基吡啶环之间存在π-anion作用, NH…O之间的氢键等。这些较强的非键作用都对该化合物的稳定性做出了贡献。?图四 在B3LYP/def2-TZVPP水平下计算得到的4+?Cl-的结构????? 为了证实这一机理，即该反应最终形成了稳定的化合物4+?Cl-，作者还进行了电喷雾质谱(ESI-MS)分析，在ESI-MS的实验中同样检测到了4+?Cl-，该实验数据（图五）支持了计算所得结论。?图五 (4+?Cl-)的电喷雾质谱(ESI-MS)信息??? 这篇文章采用了实验与计算相结合的方法。首先，对合成的化合物1-3与顺铂进行了对比性的毒理研究，验证了化合物2能更加有效的对抗癌细胞获得的耐药性。接着，通过电泳迁移方法讨论了化合物2对DNA超螺旋结构的影响。最后为了分析化合物2的化学性质，作者使用了Gaussian09软件，在B3LYP/def2-TZVPP水平下优化了化合物2的结构并计算了它与9-EtG反应的机理，证明了4+?Cl-能稳定存在。电喷雾质谱(ESI-