Livin在人喉癌细胞中的表达及白毛藤多糖的干预作用.pdfVIP

中国食物与营养 2013，19(6)：65—67 FoodandNutritioninChina Livin在人喉癌细胞 中的表达 及 白毛藤多糖的干预作用 张 杰，杨旭东，李孟全，宋高臣，申梅淑，宗灿华，刘洪凤 (牡丹江医学院，黑龙江牡丹江 157011) 摘 要：研究白毛藤多糖对人喉癌细胞生长的抑制作用以及Livin表达的影响。将 白毛藤多糖以不同浓度加入到 人喉癌细胞，用M1Tr比色法检测细胞增殖抑制率；荧光定量PCR检测LivinmRNA的表达。结果表明，白毛藤多糖 可诱导Livin基因的表达，Livin可能参与白毛藤多糖抑制人喉癌细胞的增殖。 关键词：白毛藤多糖；人喉癌细胞；Livin基因 喉癌是常见的头颈部恶性肿瘤之一，喉癌的发病机 10min，于570nm波长，用酶标仪测定各孔吸光度值 制尚不十分清楚。Livin是新发现的凋亡抑制因子 (in— (A)。根据 (1)式计算细胞生长抑制率 (inhibition hibitorofapoptosisprotein，IAP)成员，研究表明，其异 rate，IR)： 常表达和肿瘤的发生、发展有密切的关系 。因此我 生长抑制率= (对照组A一实验组A)／(对照组A一 们用白毛藤 (Solanumlyratum)作用于人喉癌细胞 ，观 空 白组A) X100％ (1) 察其对肿瘤细胞增殖的抑制作用及对Livin基因表达的 1．2．3 检测 Livin基因的表达 影响，探讨Livin基因在其抑癌中的所起作用。 Livin上游引物：5．GTCCCTGCCTCTGGGTAC一3，下 游引物：5．CAGGGAGCCCACTCTGCA．3，长度 204bp。 1 材料与方法 内参照 GAPDH上游引物：5．ACCACAGTCCATGCCAT— 1．1 试验材料 GCCATCAC一3，下游 弓I物：5一CCACCACCCTGTTGCTG— 人喉癌 Hep一2细胞株，南京凯基生物有限公司； TAG一3，长度452bp。反应条件：预变性94℃ 3min，变 噻唑蓝 (MTF)试剂，购 自泰伦生物科技有 限公司； 性94~C30s，退火55℃ 30s，延伸72℃45s，共 35个循 RPM1．1640，购 自杭州吉诺生物医药技术有限公司；RT— 环，后延伸 72℃ 5min。扩增产物经2％琼脂糖凝胶电 PCR试剂盒，购 自TaKaRa公司。 泳，凝胶电泳用凝胶成像仪进行拍照记录，KodakDigit— 1．2 试验方法 alScienceID扫描分析系统测定个 电泳条带 的光密 1．2．1 细胞培养 度(ID)。 人喉癌 Hep一2细胞株培养于青霉素和链霉素各 1．2．4 统计学分析 100U／mL的RPMI一1640培养液中，置 37℃、5％CO，饱 统计学处理采用 SPSS11．5软件，计量资料以均数 和湿度培养于培养箱中。 ±标准差 (±s)表示，进行t检验。 1．2．2 细胞增殖抑制试验 2 结果与分析 培养的Hep一2细胞消化后，以细胞浓度为 1×10 个／mL，接种于 96孑L板，分别加入浓度为 0．4、0．8、 2．1 白毛藤多糖对各组Hep一2细胞生长抑制的影响 1．2、1．6mg／mL的白毛藤多糖的培养基，每个药物浓度 白毛藤多糖对 Hep一2细胞生长的抑制作用，随药 设6个平行孔，培养36h。培养 l2、24、36h时，各空 物浓度增高，作用时间增长，抑制肿瘤细胞作用越明显 加201~LMTr溶液培养 4h，弃上清，加 15