可用于相关亚历山大藻(Alexandriumaffine)检测的一个寡核苷酸探针.pdfVIP

第 39卷 第 6期 海 洋 与 湖 沼 Vol1．39．NO．6 2008年 11月 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA NOV．，2008 可用于相关亚历山大藻(Alexandriumaffine)检测的 一 个寡核苷酸探针木 唐祥海 ，2 于仁成 ① 陈 洋 ，2 张清春 王云峰 颜 天 周名江 (1．中国科学院海洋研究所海洋生态与环境科学重点实验室 青岛 266071； 2．中国科学院研究生院 北京 100049) 提要 针对分离 自南海的相关亚历山大藻，在进行核糖体大亚基 DNA(LSU rDNA)全序列测序及 比对的基础上，设计 了针对其核糖体大亚基RNA(LSUrRNA)D10区的一个新的荧光素(FITC)标记寡 核苷酸探针，并建立 了相应的荧光原位杂交检测方法。在GenBank数据库中，BLAST检索的结果显 示所设计的探针具有较高的特异性。杂交实验 的结果也表明，这条探针对相关亚历山大藻的标记具 有特异性，且标记效率可以达到 100％，标记信号清晰明亮。本研究结果为相关亚历山大藻的监测及 其种群动态研究提供 了方法学依据，也为其它微藻特异性探针的设计提供 了新的思路。 关键词 相关亚历山大藻，寡核苷酸探针，核糖体 RNA，荧光原位杂交 中图分类号 X55 近年来，有害赤潮发生的频率、规模有逐渐增加 2007；张彬等，2o08)，因此，对于这一藻种在赤潮监 的趋势，已经成为全球性的海洋环境问题(Hallegraeff， 测 中也应予以充分重视。 1993；周名江等，2001)。在常见的有害赤潮原因种中， 传统的分类学及浮游植物调查和研究方法在有 亚历山大藻属的部分藻种 由于能够产生麻痹性贝毒 害赤潮研究中具有一定的局限性，因此，分子生物学 (ParalyticShellfishPoison，PSP)而成为关注的热点。 技术和方法近年来逐渐应用于有害赤潮 的研究和监 然而，随着研究的深入，人们发现该藻属中一些不能 测，取得 了许多重要的进展(Godheetal，2007；Caiet 产生 PSP毒素的藻种也有可能对海洋生物及近海生 al，2006)。其中，荧光原位杂交技术(Fluorescencein 态系统造成不利影响。相关亚历山大藻曾在 日本、印 situhybridization，FISH)得到了广泛的应用(Sakoetal， 度尼西亚及葡萄牙等国引起过赤潮(Nakanishietal， 2004；Andersonetal，2005；于仁成等，2006)，已成为 1996；Wageyetal，1998；Moitaetal，2003)，大多数研 有害赤潮研究与监测的最具潜力的技术之一。在我国， 究表 明这一藻种不能产生麻痹性贝毒，但在越南沿 针对亚历山大藻的分子生物学检测方法研究也 已开 海分离的一株相关亚历山大藻中曾检测到少量的麻 展(黄邦钦等，2003)。2006年，在系统分析我国沿海9 痹性贝毒毒素(Nguyen，2004)。该藻种在东海及南海 株亚历山大藻的部分核糖体 DNA序列后发现，我国 均有分布(Wangetal，2006)。本实验室以往的研究发 近海至少存在三种亚历山大藻的核糖体型，即塔玛／ 现，相关亚历山大藻对轮虫(如褶皱臂尾轮虫)、枝角 链状亚历山大藻复合种的亚洲温带核糖体型、相关亚 类(如蒙古裸腹潘)、甲壳类(如黑褐新糠虾)和贝类幼 历山大藻核糖体型和微小亚历山大藻的新西兰核糖 体(海湾扇贝、文蛤及太平洋牡蛎)的存活、繁殖和发 体型(唐祥海等，2006)。在此基础上，通过设计针对核 育存在不利影响(wangetal，2005；陈桃英等，2006， 糖体大亚基RNA(LSUrRNA)Dl--D2区的特异性寡 中国科学院知识创新工程重要方向性项 目，KZCX