HDA法用于检测肉中金黄色葡萄球菌的研究.pdfVIP

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2014，Vo1．30，No．1 HDA法用于检测肉中金黄色葡萄球菌的研究 周巍 ’一，张薇 ，吴涛 ，李永波 ，田浩 ，赵勇 ，张岩 ，张志胜’ (1．河北农业大学食品科技学院，河北保定 071000)(2．河北省食品质量监督检验研究院，河北石家庄 050091) 摘要：本文研究了猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌的依赖解旋酶恒温基因扩增检测方法(HDA法)，以金黄色葡萄球 菌耐热核酸酶，z基因为 目的基因，设计一对特异性引物，优化反应条件uvrDhelicase、T4gp32的浓度，通过赖解旋酶恒温基因扩增 方法直接检测猪肉、牛肉、羊肉、鸡 肉中金黄色葡萄球菌，扩增产物通过电泳进行检测 结果表明，HDA法检测肉中金黄色葡萄球 菌的特异性强，试验涉及的其它菌株未发生扩增，只有金黄色葡萄球菌得到与设计序列长度一致的216bp基因片段，检出限为10 CFU／g，优化确定uwDhelicase、T4gp32的终浓度分别为0．1 、5．0Pg，该方法用于检测猪 肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌 的灵敏度高，耗时短，为猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了新的方法，也为其它食品中金黄色葡萄球菌的 快速检测奠定了基础。 关键词：解旋酶恒温基因扩增检测方法；肉；金黄色葡萄球菌；检测； 基因 文章篇号：1673．9078(2014)1．185．189 Detecti0nofStaphyloccocusaureusinM eatbyHeliease．dependent IsothermalDNAAmplificationAssay ZHoUW ei ，z】 NGW ei2W UTao2LIYong-bo2TIAN Hao，ZHAOYong2zHANGYaln， ， ， ， ， ZHANGZhi-sheng (1．AgriculturalUniversityofHebei，CollegeofFoodScienceandTechnology,Baoding071000，China) (2．HebeiInstituteofFoodQualiytSupervisionInspectionandResearch，Shijiazhuang050091，China) Abstract：Ahelicase-dependentisothermalDNAamplification(HAD)methodisusedforrapidandaccuratedetectionStaphy-loccocus aureusinpork,beef,muRonandchicken．Apairofoligonucleotideprimersexclusivelyma plifiedtheHUCgeneofStaphyloccocusc／ured／s，htus， Staphyloccocusaul~ruscouldbedirectlydetectednipork,bee￡muttonandchickne．ThefnialconcentrationsofUvrD helicaseandT4gp32 wereoptimized．Th ema plificationproductwasdetectedbyelectrophoresis．Th eresultsshowedhtatHAD mehtodhadhi specificity in detectionofStaphyloccocusaUl~al~Sinmeat，buthteohterbacteriacouldnotbene amplificated．Th ema plificationproducthadhtesame216bpl lengthashtedesignedgenefragmen~nadhtedetectionlimitwas10 CFU／g．Th eoptimizedconcentr