Eg5基因对膀胱癌T24细胞增殖和迁移的影响.pdfVIP

· 748 · 安徽 医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6) Eg5基因对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移的影响 陈杰勋 ，于德新 ，张志强 ，王 铮 ，谢栋栋 ，王 毅 ，张 涛 ， 陈 磊 ，丁德茂 ，邹 慈 ，闵 捷 ，褚 晗 摘要 目的 通过RNA干扰阻断T24细胞中Eg5基因的表 不稳定和肿瘤发生 J。近来研究 。显示 Eg5在多 达，研究E 基因对 T24细胞增殖和迁移的影响。方法 种恶性肿瘤中呈高表达，如前列腺癌、肝癌、肺癌等。 T24细胞株分为3组：干扰组、空 白对照组、阴性对照组。化 Dingetal 研究发现，膀胱癌组织Eg5表达明显高 学合成针对E 的小干扰 RNA，通过脂质体转染至T24细 于正常膀胱组织，且与预后密切相关，但具体机制尚 胞中，应用Westernblot法检测转染后 T24细胞中Eg5蛋白 不清楚。该研究 旨在运用小干扰 RNA(smallinter— 表达，采用 台盼蓝拒染实验检测细胞死亡率 ，用 噻唑蓝 fering，siRNA)沉默 Eg5在膀胱癌 T24细胞株中表 (MTT)比色分析法和平板克隆形成实验检测细胞增殖抑制 达 ，观察其对膀胱癌细胞增殖与迁移的影响。 率，通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果 干扰组 E 蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组；干扰组细 1 材料与方法 胞死亡率显著升高，与空白对照组及阴性对照组比较差异有 统计学意义(P0．05)；干扰组的克隆形成率下降，与空白 1．1 材料 人膀胱移行上皮癌 T24细胞株购于中 对照组和阴性对照组 比较差异有统计学意义 (P0．05)； 国典型培养物保藏中心。Eg5鼠抗人单克隆抗体 M1Tr结果提示 ，干扰Eg5基因表达后 ，T24细胞的增殖率明 (美国Abcam公司)；转染脂质体 Lipofectamin2000 显下降(P0．05)；划痕实验结果显示干扰组细胞迁移能力 (美国Invitrogen公司)；RPMI1640细胞培养液、胰 受到明显抑制 (P0．05)。结论 Eg5基因在膀胱移行细胞 蛋 白酶(美国Gibco公司)；噻唑蓝(MTF)(美国Sig— 癌起重要作用，干扰Eg5基因能有效抑制T24细胞的增殖与 ma公司)。3组针对Eg5基因的siRNA序列参照文 迁移，促进细胞死亡 ，以E 为靶点有望成为膀胱癌基因治 献 卜 由上海吉玛制药有限公司合成：干扰 1组正 疗的新基因靶点。 义链 ：5一CCGAGCuCuCUUAUcAACArr-3，反义链 ： 关键词 RNA干扰；Eg5基因；膀胱癌 5．GAUAACAGAuCGG，邝．3；干扰 2组正义链 ：5一 中图分类号 R737．14 CUCAAGACCuGAAGACAAUTT一3，反义链 ：5一AUU— 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)06—0748—04 GUCUUCAGGUCUUCAGTT．3；干扰 3组正义链 ：5一 AGGACAACUGCAGCUACUCIT一3，反 义 链 ：5一 纺锤体 驱 动蛋 白Eg5(又称 KSP、KIF11、 GAGUAGCUGCAGUUGUCCUTT一3 。 KNSL1)最早是从非洲爪蟾卵中克隆出来的驱动蛋