基于多酶协同作用白腐真菌菌株应用开发技术.pptVIP

基于多酶协同作用的白腐真菌应用开发技术 常熟理工学院 梁剑光 博士 副教授 2012年8月 上海 应用之二：白腐菌固态发酵腐熟技术 白腐菌腐熟稻草电镜照片：可明显加速腐熟最直接的证据 本项目应用前景与合作优势： 1.利用菌种酶系之间的协同效应，有效提高产酶水平和酶解效果。 2.白腐真菌腐熟技术采用液体菌种接种技术，固态与液态、腐熟与土囊杀虫等发酵技术相结合，适应性强，推广简单。 3. 所筛选的菌种优良，建立了一系列的白腐真菌筛选技术和发酵工艺技术，易于开发推广。 4. 常熟理工学院地处长三角发达地区，与上海距离近交通方便，可有效利用学生资源。（地域与资源优势） 5. 项目负责人具有与多家上市企业的合作经验，如：浙江升华拜克（杀虫剂）、安琪酵母（酶制剂）、钱江生化（发酵）等。 6.希望与上海联业开展本项目的合作，将本项目推向市场和产业化。 使用有机物料腐熟的效果：缩短发酵时间（快腐）、 除臭（异味）、定向腐熟（有效） 稻壳灰的扫描电镜 试样内部白腐菌生长情况 上图：不用腐熟菌剂 下图：用 腐熟菌剂 结论 ： 各种微生物和酶存在协同效应，所以在筛选菌种高效产酶方面，组合菌种无疑是一种有效的高效产酶筛选方式，相对基因工程方法显得更加简单快速，可较大程度提高这3个菌种后续研究和应用的效率，也为提高其他白腐菌相关领域研究和应用效率提供重要参考。 * * 白腐真菌 生物学基础 （理论基础） 白腐真菌 开发技术 （应用基础） 一、白腐真菌生物学特性 1、白腐真菌（White Rot Fungi） 白腐真菌的概念不是生物学术语，而是一种功能描述的概念 纤维素 木腐真菌 Wood Rotting Fungi 木质 纤维素 Ligno- cellulose 软腐真菌 Soft rot Fungi 褐腐真菌 Brown rot Fungi 白腐真菌 White rot Fungi 木质素 半纤 维素 多糖类 软腐真菌：主要降解纤维素，对木质素降解 缓慢且不彻底。 褐腐真菌：主要降解纤维素、半纤维素和部 分多糖类，几乎不降解木质素。 白腐真菌：主要降解木质素和多糖类，对纤 维素和半纤维素降解能力弱。 2. 白腐真菌的生长与代谢特点（黄孢原毛平革菌） 营养期 初生生长 白腐真菌 繁殖期 次生生长 停滞期 对数期 细菌 静止期 生长是线性的，生物量 显著增加。 生长基本停滞，甚至发生 生物量的下降。 诱因： 氮限制 （nitrogen limitation, N-L） 碳限制 （carbon limitation, C-L ） N-L在木质素降解中的作用: 实质上是白腐真菌在进化过程中对环境中氮缺乏的一种生理适应。 C-L在木质素降解中的作用: 主要是它和菌丝体质量的减少像偶联，从而启动了次生代谢。 与木质素降解有关的几个基本概念 营养限制 N-L和C-L 木质素的降解 木质素降解酶的合成 要求 木质素降解条件 Ligninolytic condition 培养体系 生理特征 参与的酶 木质素降解培养 Ligninolytic culture 木质素降解活性（木质素降解活动） Ligninolytic activity 木质素降解酶 Ligninolytic enzyme 白腐真菌对木质素的降解过程是一个共代谢(cometabolized)过程 木质素 完成降解过程 白腐真菌 ？ + 生长底物 Growth substrate 白腐真菌 共代谢的两种方式 1、某种生物将一种底物转化，却无法在这种底物上生长，即生物体 不能利用这种底物氧化所产生的能量去维持生长。 2、一些生物为了共同的效应，共用其生物化学资源，协同作用，对 化合物进行降解。 白腐真菌降解木质素属于何种方式？ 3 白腐真菌在培养中的特点（黄孢原毛平革菌） 这里的培养特指实验室中小规模的,以研究基本规律为目的的培养 接种物 接种 方式 菌丝体 孢子 按干重或是湿重计量 优点：能准确量化 能保证碳、氮营养限制 应用范围：基础研究和应用研 究初期 接种方式：制备孢子悬浮液 （spore suspension, SS）按 　　培养基量成一定比例接入 关键是 接种物 的定量 培养方式 (实验室规模的一般性培养) 按培养基的物理状态划分 半固体培养体系 固体培养体系 液体培养体系 静置培养 Standing culture 振荡培养 Shaking culture 静置培养 Standing culture 固定台面 孢子 1-2天 菌丝垫或菌垫 Mycelial mat