光合产氢细菌优势菌群富集及其产氢实验的研究.docVIP

光合产氢细菌优势菌群富集及其产氢实验研究 摘 要: 利用特殊培养基从光照充裕、有机质含量高的猪场粪便排放处的污泥中富集培养光合细菌混合产氢菌 群，对该混合菌群的产氢培养基进行优化，并研究混合菌群的产氢特性。实验结果表明，此菌群的最佳产氢培养基 配方为: 氯化铵 0． 4g/L，氯化镁 0． 2g/L，酵母膏 0． 1g/L，磷酸氢二钾 0． 5g/L，氯化钠 2． 0g/L，谷氨酸钠 3． 5g/L。此 菌群以1%的葡萄糖为基质时，产氢时间长达204h，最大产氢量为 3． 41L/L，最大产氢速率为44． 17mL/( L·h) ，最高 氢气含量为 46． 73%，具有工业化应用价值。 关键词: 光合细菌; 培养基; 产氢速率; 氢气 0 引 言 氢气可通过化学方法对化合物进行重整、分解、 光解或水解等方式获得，也可通过电解水获得，或是 利用产氢微生物进行发酵或光合作用来制得( 生物制 氢) ［1，2］ 。在目前的文献中，光合细菌被认为是生物制 氢中最具潜力的微生物，光合细菌制氢是极有发展前 景的生物制氢方法之一 ［3，4］ 。光合细菌制氢中，菌种 性能的优劣直接关系到生物制氢技术各项经济指标 的水平 ［5］ 。菌种的性能是影响光合细菌的产氢效率、 原料转化效率和光转化效率等各方面的决定因素。 目前，有关光合细菌产氢的研究大多采用纯菌 或系统筛选纯菌进行研究，系统筛选混合光合细菌 的研究报道较少。纯菌种制氢有灭菌成本高、易受 杂菌污染、菌种保藏困难、原料利用单一等缺点; 而 混合菌群由于存在多菌种的协调效应，具有原料利 用率高、产氢效率高等优势。高效优势菌群的筛选 对光合细菌制氢工艺的发展有很大的推动作用，具 有广泛的应用前景。光合细菌在腐败有机质含量高 的环境中生长旺盛，在厌氧光照条件下能利用多种 有机物营光能异养生活 ［6 ～8］ 。从特定环境的菌源中 筛选光合细菌菌种，能保证其具有较高的有机物分 解能力和产氢能力 ［9，10］ 。本课题研究中选择光照充 裕、有机质含量高的猪场粪便排放处的污泥为菌源， 采用特殊培养基进行光合细菌菌种的富集培养得到 光合细菌优势菌群。修正优化适合该光合菌群的产 氢培养基，从而提高产氢量和产氢速率。 1 材料与方法 1． 1 材 料 污泥采自河南农业大学牧医工程学院养殖场粪 便污水排放处。 富集培养基 ［11］ : NH 4 Cl 0． 10g，NaHCO 3 0． 20g， K 2 HPO 4 0． 02g，CH 3 COONa 0． 30g，MgSO 4 ·7H 2 O 0． 02g，NaCl 0． 20 g，酵母膏 0． 10g，蒸馏水 96mL，微 量元素溶液 ( FeCl 3 ·6H 2 O 5． 00mg，CuSO 4 ·5H 2 O 0． 05mg，H 3 BO 4 1． 00mg，MnCl 2 ·4H 2 O 0． 05mg; ZnSO 4 ·7H 2 O 1． 00mg，Co ( NO 3 ) 2 ·6H 2 O 0． 5mg ) 1． 00mL，pH = 7． 00。 各成分溶解后 100Pa 灭菌 20min。 产氢培养基 ［12］ : 以组成为 NH 4 Cl 1． 0g / L，MgCl 2 0． 2g / L，酵母膏 0． 1g / L，K 2 HPO 4 0． 5g / L，NaCl 2． 0g / L， pH = 7． 00 的培养基作为产氢培养基的基本配方，并 对此进行修正优化。 1． 2 实验方法 1． 2． 1 光合产氢混合菌群的富集实验112 太 阳 能 学 报 34 卷 将 40mL 污水和 200g 底泥放入 1000mL 带塞磨 口瓶中，加满富集培养基，搅拌均匀。盖上塞子，用 凡士林封口，隔绝空气。置于 30℃，白炽灯 40W 照 明( 光照为 5 ～ 10klx) 的培养箱中培养 3 ～ 5d，待液 体培养物呈现红色或红棕色。再用吸管插入菌液中 自光合细菌生长良好的瓶内壁处，吸入菌液 75mL， 移植到具塞的 1000mL 磨口玻璃瓶中，加入新配制 的富集培养液继续按照上述条件进行光照、厌氧培 养，直至玻璃瓶壁上出现光合细菌菌落，或整个培养 液长成红色。再按照上述同样的步骤转接 3 次培养 基培养，光合细菌压倒其他细菌而占绝对优势，培养 液呈深红色，这时富集培养成功。 1． 2． 2 光合产氢混合菌群产氢优化实验 1) NH + 4 含量的优化 以1%葡萄糖为产氢基质，加入3．5g/L 谷氨酸钠 做氮源。调 pH 为 7，温度为 32℃，光照强度为 2klx。 改变 NH + 4 的含量依次为 1． 0、0． 8、0． 6、0． 4、0． 2g/L。 每隔24h 记录一次产气量，记录不同 NH + 4 含量时，所 产生的气体体积和所产气体中氢气含