B_01 苯酚生物降解菌筛选.pptVIP

Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University Central Laboratory of Biology Central Laboratory of Biology 苯酚生物降解菌的筛选 课前预习与目的要求 【课前预习】 　1. 梯度稀释涂平板技术。 　2. 单碳源培养筛选法。 【目的要求】 　1. 掌握微生物分离纯化的基本操作； 　2. 掌握用选择性培养基从土壤中分离苯酚生物降解菌的原理和方法。 基本原理 苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。因此采用一定的方式降解苯酚，对保护人类健康、消除环境污染意义重大。在提倡绿色环保的大前提下，采用生物降解的途径势在必行。 微生物对污染物质的代谢、转化及降解作用，是当今环境污染研究中最活跃的领域之一。自然界中能降解烃类的微生物有几百种，多为细菌、酵母菌和真菌，降解是由他们所产生的酶和酶系统完成的，一般直链化合物比支链化合物、饱和化合物比非饱和化合物、脂肪烃比芳香烃容易被较多种类的微生物降解和同化。直链烃的降解是末端甲基被氧化形成醇、醛后再生成脂肪酸，由脂肪酸形成醋酸，最后氧化成二氧化碳和水，微生物对单环芳烃及其衍生物的降解与直链烃类似，能降解苯和酚的微生物种类很多，细菌中的很多属，放线菌等。 基本原理 苯酚是芳香烃化合物。苯酚是常用的表面消毒剂之一，它们是TCA（三羧酸）循环的抑制剂。现已发现某些假单胞菌、争论产碱菌、真养产碱菌含有芳香烃的降解质粒，将其降解生成琥珀酸、草酰乙酸、乙酰CoA，进入TCA循环。 在苯酚浓度梯度培养基平板高含药区上分离出的菌落，对苯酚具有较好的耐受性，可能具有分解酚菌的能力；然后将其在以苯酚为唯一碳源的培养基里进行摇床培养，淘汰掉不能利用苯酚的菌株，可筛选到苯酚降解菌；再用不同浓度的苯酚药物培养基分离，可筛选出耐受能力好，降解程度高的苯酚降解菌。 实验用品 1．材料：（样品）　实验土样采自校园肥沃土。 2．器材和仪器：试管、250ml三角烧瓶、1 mL吸管、吸耳球、无菌涂棒、量筒、天平、灭菌锅、培养箱、酒精灯、接种环、棉花、棉线、牛皮纸。 3．试剂：牛肉膏 蛋白胨 苯酚 K2HPO4 KH2PO4 MgSO4 FeSO4 琼脂 4. 培养基　 4. 培养基 A. 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g