流苏石斛ISSR_PCR反应体系的优化.pdfVIP

云南大 学学报 ( 自然科 学版) , 2008 , 30 ( S1) : 406～410 CN 53 - 1045/ N 　ISSN 0258 - 7971 Journal of Yunnan University 流苏石斛 ISSR - PCR 反应体系的优化 马佳梅1 ,2 , 殷寿华1 ( 1. 中国科学院 西双版纳热带植物园 ,云南 勐腊 　666303 ;2 . 中国科学院 研究生院 ,北京 　100039) 摘要 : 以流苏石斛为材料 ,对影响 ISSR - PCR 扩增结果的因素进行了探讨 ,建立了适合流苏石斛 ISSR - 2 + μ PCR 分析的最佳反应体系. 在 20 L 反应体系中含 1 ×buffer ,2 . 0 mmol/ L Mg , 1. 0 mmol/ L dN TP s , 1. 0 μ 引物 ,0 . 5 U TaqDNA 聚合酶 ,10 ng 模板 DNA . 扩增程序为 :94 ℃预变性 5 min ;94 ℃变性 45 s ,50 ℃退 mol/ L 火 45 s ,72 ℃延伸 45 s ,共 35 个循环 ;最后 72 ℃延伸 7 min . 关键词 :流苏石斛 ; ISSR ;反应体系 ;优化 ( ) 中图分类号 :Q 943 . 2 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :0258 - 797 1 2008 S1 - 0406 - 05 ( ) 　　流苏石斛 Den d robi u m f i m briat u m Hook 为 而采用 ISSR 技术对野生流苏石斛的遗传多样性 兰科石斛属多年生附生植物 ,为中药石斛的来源之 和居群遗传结构进行的研究目前尚未见报道. 一 ,且具有观赏价值 ,产广西南部至西北部 、贵州南 1 　材料与方法 部至西南部 、云南东南部至西南部. 生于海拔 600 ～1 700 m 的密林树干上或山谷阴湿岩石上[ 1 ] . 一 1 . 1 　材料 　实验所用的流苏石斛居群材料采集于 方面 ,近年来 , 国内外对著名中药石斛和观赏用石 西双版纳的绿石林 、银厂 、红石崖 、勐醒矿山、曼丕 斛的开发应用较多 ,环境的破坏和人为掠夺性采挖 等地的石灰山 ,共 5 个居群. 严重 ;另一方面 ,石斛属植物的生境独特 ,对小气候 1 . 2 　方法 环境要求十分严格 ,而人类活动导致的生境破坏更 1.2 . 1 　DNA 提取与检测 　本实验采用改进 的 加剧了野外资源的减少. 因此 ,深入了解环境变化 C TAB 法[7 ] 提取 DNA ,获取的总 DNA 用 1 %琼脂 对石斛属植物种群遗传多样性及其遗传结构的影 糖凝胶检测 , 据相对 的 EB 染色荧光强度 , 对总 响 ,对恢复和增强石斛