基因组DNA提取方法比较及不同引物对COⅠ、COⅡ、cytb序列的扩增效果.pdfVIP

一 32一 江苏农业科学 2013年第41卷第 1期 陈景芸，陈云芳，詹国辉，等．美国白蛾基因组DNA提取方法比较及不同引物对CO 、CO口、cytb序列的扩增效果 [J]．江苏农业科学 2013 ， 41(1)：32—34． 美国白蛾基因组 DNA提取方法比较及不同引物 对 COI、CO1I、Cytb序列的扩增效果 陈景芸 ，陈云芳 ，詹国辉 ，高 渊 ，蔡 平 (1．苏州大学建筑与城市环境学院，江苏苏州215123；2．苏州出入境检验检疫局 ，江苏苏州215126) 摘要：以美国白蛾[Hyphantriacunea(Dmry)]冬蛹为材料，采用 CTAB法、SDS法、改进SDS法和试剂盒法以及不 同处理时间提取美国白蛾的基因组DNA。分别采用3组扩增 cD，序列、2组扩增 cO 序列和 1组扩增 cytb序列 的引物 ，对美国白蛾基因组 DNA进行 PCR扩增。结果表明：采用 CTAB法、SDS法和改进的SDS法均能提取到完整 DNA，其中低浓度SDS法效果最佳；6组引物都能扩增出相应片段 ，以用于扩增COI序列的2组引物效果较好。 关键词：美国白蛾 ；基因组DNA提取 ；引物；COI；CO1I；cytb 中图分类号：Q785 文献标志码：A 文章编号 ：1002—1302(2013)01—0032—02 美国白蛾 [Hyphantriacunea(Drury)]又名秋幕毛虫、秋 Tris、CTAB(加拿大 BBI公司)；EDTA、SDS、蛋 白酶 K、 幕蛾，属鳞翅 目(Lepidortera)灯蛾科 (Arctiidae)灯蛾亚科 6×GlycerolDNAloadingBuffer、AgaroseI、酚一氯仿一异戊醇 (Arctiinae)。该虫食性杂、食量大、繁殖能力强，可危害包括 (25：24：1)混合液、氯仿 一异戊醇(24：1)混合液、UNIQ一 林木、果树、花卉、农作物和蔬菜在 内的300多种植物，是世界 10柱式动物基因组DNA抽提试剂盒(上海生工公司)；Mark． 著名的检疫性有害生物。自1979年传人我国后 ，先后几次在 er(大连TaKaRa公司)；EB(海 门碧云天生物技术研究所)； 辽宁、山东、陕西、河北、天津、北京等地爆发成灾。国务院办 10×TaqbufferwithKC1、MgC12、dNTPmix、DNA聚合酶 (加拿 公厅曾多次下发文件，要求大力加强美国白蛾查防治理工作， 大Fermentas公司)；其他试剂为国产分析纯。 疫区各地政府也纷纷投入大量人力物力及财力严格控制疫情 1．4 仪 器 的发生和蔓延。为了寻找美国白蛾DNA特异性序列 ，利用分 Thermostatplus恒温孵育器、5415R冷冻离心机、Moster— 子检测技术鉴定美国白蛾与近似种，建立美国白蛾的快速分 cyderepgradiants梯度 PCR仪、移液枪 (德国Eppendorf公 子鉴定、口岸侦测和国内发生检测与控制技术，本研究以美国 司)；Bub—cellBasic水平 电泳槽、PowerPacBasic电泳仪 (美 白蛾冬蛹为试验材料，比较5种美国白蛾基因组 DNA的提取 国伯乐公司)；G—BOX凝胶成像系统 (香港基因有限公司)； 方法及6组不同引物分别对美国白蛾COI、CO口和c b序 ThemroNanodrop2000超微量分光光度计 (美国)。 列的扩增效果，以便找到既简便易行、成本低廉 ，同时能获得 2 方法 浓度适宜、高纯度 DNA的方法。 2．1 基 因组 DNA提取 1 材料