鸡球虫mtCOI基因片段序列的克隆与系统学分析.pdfVIP

第 32 卷 增刊 水 生 生 物 学 报 Vol.32, Suppl. 2008 年 5 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA May, 2008 DOI 号：10.3724/SP.J.0000.2008.70074 鸡球虫 mt CO I 基因片段序列的克隆与系统学分析 王 鑫 韩红玉 姜连连 赵其平 董 辉 韩静芳 黄 兵 ( 中国农业科学院上海兽医研究所, 农业部动物寄生虫学重点开放实验室, 上海 200232) 摘要：利用扩增的鸡球虫线粒体细胞色素 C 氧化酶 Ⅰ亚基（mt CO Ⅰ）基因片段，对鸡柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella ）、毒害艾美耳球虫（E. necatrix ）、巨型艾美耳球虫（E. maxima ）、堆形艾美耳球虫（E. acervulina ）、变位 艾美耳球虫（E. mivati ）进行系统进化研究。提取5 种球虫 12 个株的总 DNA ，利用合成的引物进行PCR 扩增和 序列分析，将得到的序列登录 GenBank ，进行同源性和趋异性分析，并分别用NJ 法和 UPGMA 法构建进化树。 序列分析结果显示：PCR 扩增后均得到长度为 811 bp 的 mt CO Ⅰ基因片段；多序列比对发现种内无差异，种间差 异较大，其中柔嫩艾美耳球虫与毒害艾美耳球虫的相似性最高（98.4% ），巨型艾美耳球虫与堆形艾美耳球虫的相 似性最低（86.1% ）。5 种球虫的 mt CO Ⅰ基因遗传距离分析显示：巨型艾美耳球虫与毒害艾美耳球虫的遗传距离 最大（0.171 ），柔嫩艾美耳球虫与毒害艾美耳球虫的遗传距离最小（0.017 ）。NJ 法和 UPGMA 法构建的进化树结 果一致，均显示 5 种鸡球虫中柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近，与堆形艾美耳球虫、变位艾美 耳球虫和巨型艾美耳球虫共同聚为一大类，可与其他原虫明显区分。本研究首次利用 mt CO Ⅰ基因进行球虫的系 统进化分析，其种内与种间鉴定结果与普通生物学鉴定结果一致，表明该基因有可能成为区分球虫不同种的理想 基因，将为建立球虫 DNA 条形码奠定基础。 关键词：鸡；球虫；艾美耳球虫；细胞色素 C 氧化酶 Ⅰ亚基；序列分析；系统进化 中图分类号：Q781 ；Q349+ .5 文献标识码：A 文章编码：1000-3207(2008)增-0074-06 近年来, 线粒体DNA （mt DNA ）在进化遗传学 种分类鉴定的重要分子越来越受到分类研究者们 方面的研究已成为分子进化遗传学领域的研究热 的重视。目前mt CO Ⅰ基因在无脊椎动物分类研究 点。真核生物mt DNA是染色体外的遗传物质，具 中应用较普遍，如研究者们对蝴蝶(Astraptes 有其独特的遗传信息系统。由于mt DNA 比核基因 fulgerator )[3]、水蛭(Helobdella triserialis) [4]、对虾 组小，而且结构简单，不含内含子和基因间序列， (Fenneropenaeus Chinensis)[5] 等都进行过mt CO Ⅰ 没有重复序列，因此，mt DNA 已成为研究真核生 基因的相关研究。在寄生虫领域也曾对美洲钩虫 物分子遗传学、发育生物学和分子系统进化的一种 (Necator americanu) 及十二指肠钩虫(Ancylostoma 重要分子，对mt DNA 中特定基因片段进行序列分 duodenal) [6,7] 、日本血吸虫大陆株(Schistosoma 析也成为研究生物分子系统学的一种重要手段。分 japonicum