猪囊尾蚴CE18重组蛋白的复性纯化及抗原性鉴定.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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猪囊尾蚴CE18重组蛋白的复性纯化及抗原性鉴定.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, August 25; 24(8): 1490-1495 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法猪囊尾蚴CE18 重组蛋白的复性纯化及抗原性鉴定张少华, 贾万忠, 骆学农, 景志忠, 吴国华, 郑亚东, 郭爱疆, 才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 甘肃省动物寄生虫病重点实验室, 兰州 730046 摘要: 猪囊尾蚴CE18 重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体, 为了获得高纯度的、有生物活性的rCE18, 本研究采用超声破碎菌体, 0.2% 、2% DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9% SKL(十二烷基肌氨酸钠)溶解包涵体后, 利用透析与凝胶过滤层析技术相结合对rCE18 进行复性和纯化。同时, 采用GST-FF 亲和柱层析及SDS胶回收蛋白两种方法纯化rCE18, 比较三者的纯化效果。并通过间接ELISA 检测复性蛋白的生物学活性。结果表明: 经透析与凝胶层析复性纯化后的rCE18 蛋白的纯度可达到60% 以上, 活性回收率为41.3%, 间接ELISA 证实, 复性后的rCE18 蛋白能特异性识别猪囊虫阳性血清, 检测敏感性高达 97.2%, 与全囊虫抗原检测的符合率为 100%。本试验初步建立了猪囊尾蚴rCE18 包涵体纯化及复性的有效方法, 为猪囊尾蚴rCE18 蛋白的诊断应用奠定了基础。关键词: 猪囊尾蚴, CE18 重组蛋白, 复性, 纯化, 透析, 凝胶过滤层析 Renaturation, Purification and Antigenicity Identification of Recombinant Protein of Cysticercus cellulosae Expressed in Escherichia coli Shaohua Zhang, Wanzhong Jia, Xuenong Luo, Zhizhong Jing, Guohua Wu, Yadong Zheng, Aijiang Guo, and Xuepeng Cai Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province, State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute , Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China Abstract: To obtain the recombinant 18 kD protein with high purity and normal