牡丹SCoT分子标记正交优化及引物筛选.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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牡丹SCoT分子标记正交优化及引物筛选.pdf

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华北农学报 ·2 0 1 1 ，2 6 (5 ):9 2 -9 6 牡丹SCoT 分子标记正交优化及引物筛选 1 1 1 2 2 3 ，，，，，侯小改王娟贾甜张钰乾侯娟李嘉珏 (1．， 471003 ;2．， 471003 ;3．， 471011) 河南科技大学农学院河南洛阳河南科技大学林学院河南洛阳中国洛阳国家牡丹基因库河南洛阳 : DNA ， L (45 ) - 摘要以牡丹基因组为模板采用 16 正交试验设计对影响目标起始密码子多态性聚合酶链式反应 (SCoT-PCR) (Taq 、Mg2 + 、 DNA 、dNTPs ) ，的五因素酶用量浓度模板用量浓度和引物浓度进行优化试验建立了优化的 SCoT-PCR :Mg2 + 2 ． 50 mmol / L 、dNTPs 0 ． 25 mmol / L 、 0 ． 60 mol / L 、Taq DNA 0 ． 50 U 、牡丹反应体系引物 μ 聚合酶模板 DNA 1． 00 ng / L ，1 × PCR-Buffer ， 20 ． 00 L 。， Mg2 + ， μ 总体积 μ 比较各因素对扩增反应的结果其中以浓度的影响最大 DNA 。 17 ， 36 SCoT 模板用量的影响最小运用牡丹个品种验证了该体系稳定可靠并从个引物中筛选出扩增条带清、 24 。 SCoT 晰多态性丰富的个引物这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用标记技术对牡丹进行相关研究提供了科学依据。 : ;SCoT-PCR ; ; ; 关键词牡丹反应体系正交设计引物筛选中图分类号:S567 ． 03 文献标识码:A 文章编号:1000 － 7091 (2011)05 － 0092 － 05 Orthogonal Optimization of SCoT-PCR System and Primer Screening of Tree Peony 1 1 1 2 2 3 HOU Xiao-gai ，WA