水牛瘤胃宏基因组的一个新的b-葡萄糖苷酶基因umcel3G的克隆、表达及其表达产物的酶学特性.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 232-238 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 β- umcel3G 1, 2 2 2 1, 2 1, 2 1, 2 郭 鸿 , 封 毅 , 莫新春 , 段承杰 , 唐纪良 , 冯家勋 1 , , 530005 2 , 530005 : 以木质纤维素为原料、应用同步糖化共发酵工艺发酵生产酒精时需要酸性中低温高活力纤维素酶包括β- 葡萄糖 苷酶。本工作分 6 次构建了水牛瘤胃未培养微生物宏基因组文库, 获得 1.26 ×105 个克隆, 文库含外源 DNA 的总长度 约为 4.8 ×106 kb 。从文库中筛选到 118 个表达β- 葡萄糖苷酶活性的独立克隆。发现其中 8 个克隆表达的β- 葡萄糖苷酶在 pH5.0 、37oC 条件下活性较强。对其中一个克隆进行了亚克隆, 序列分析发现一个 2223 bp 的潜在的编码β- 葡萄糖苷酶 基因(umcel3G) 的开放阅读框(ORF), 其编码产物的氨基酸序列与来自于 Bacillus sp. 的一个β- 葡萄糖苷酶同源性最高, 具有 60%的一致性和 73% 的相似性。该 ORF 在 E.coli 中的表达产物 Umcel3G 的分子量与预测大小相似, 酶谱分析表明 该表达产物具有β- 葡萄糖苷酶活性, 证实该基因为一个β- 葡萄糖苷酶基因。测定了用 Ni-NTA 纯化的 Umcel3G 的酶学特 性, 其最适 pH 和最适温度分别为 6.0~6.5 和 45oC 。一些金属离子如 Ca2+ 、Zn2+ 能显著提高该酶的酶活, 而另外一些金 3+ 2+ o 2+ 属离子如 Fe 、Cu 能抑制 Umcel3G 的活性。在 pH4.5 、35 C 和 5 mmol/L 的 Ca 存在的条件下, 用 Ni-NTA 纯化的重 组酶的比活为 22.8 IU/mg, 说明该酶在用 SSCF 工艺发酵生产酒精中有潜在的应用价值。 : 未培养微生物, 宏基因组, β- 葡萄糖苷酶, 木质纤维素, 同步糖化共发酵 Cloning and Expression of a β-Glucosidase Gene umcel3G from Metagenome of Buffalo Rumen and Characterization of the Translated Product 1,2 2 2 1,2 1,2