猪成纤维细胞细胞周期同期化对核移植胚胎发育的影响.pdfVIP

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基因组学与应用生物学,2013年,第32卷,第 1期,第 卜7页 GenomicsandAppliedBiology,2013,Vo1.32,No.1,卜7 研究论文 ResearchArticle 猪成纤维细胞细胞周期同期化对核移植胚胎发育的影响 吴正三 杨素芳 陈凌声 陈施蓓 汪彩珠 石德顺 广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530005 通讯作者.ardsshi@gxu.edu.cn 摘 要 供体细胞所处的细胞周期及细胞周期同期化的方法对于体细胞核移植(somaticcellnucleartransfer, SCNT)的成功非常重要,本研究对血清饥饿培养处理与培养至完全汇合后的猪成纤维细胞周期同期化水平进 行了检测。利用不同方法对猪成纤维细胞同期化处理后,通过流式细胞仪对细胞的细胞周期分布 比率进行了 检测 。将细胞进行血清饥饿 24~72h,显著地增加了GgG期的细胞百分率(92.2%~93.7%VS.77.8%,PO.o5)。将 细胞培养至完全汇合后再培养24~48h,GgG期的细胞比例类似于血清饥饿法(94.4 89.60/o)。血清饥饿24h后, 置换为 10%FBS能逆转至生长期。用这两种不同方法处理后的体细胞作为核移植的供体构建重构胚,分裂率 与囊胚率差异不显著(P0.05)。结果表明,猪成纤维细胞通过血清饥饿法或者培养至汇合完全均能有效地将细 胞周期同期化至Go/G期,且均可作为体细胞核移植的供体细胞。 关键词 猪,成纤维细胞。细胞周期同期化,体细胞核移植(SCNT),胚胎发育 EffectsOfCel1CycleSynchronizationofFibroblastsontheDevelopmentof PorcineNuclearTransferEmbryos W uZhengsan YangSufang ChenLingsheng ChenShibei W angCaizhu ShiDeshun LaboratoryforProtectionandUtilizationofSub—tropicalBio—resources,GuangxiUniversity,Nanning,530005 Correspondingauthor,ardsshi@gxu.edu.Gn DOI:10.3969/gab.032.000001 Abstract Donorcellincellcycleandcellcyclesynchronizationraeveryimportantforthesuccessofsomaticcell nucleartransfer(SCNT).Inthisstudy,weexaminedtheeffectsofserumstarvation,culturetoconfluenceoncellcy- clecharacteristicsofporcinefibroblastcells.Theeffectofthevariousmethodsofcellcyclesynchronizationwasde- terminedbyflowcytomertry.24-72hserumstarvationincreased 0.05)theproportionofcellsattheGo/G1phase (92.2%-93.7%)ascomparedtothecontrolgroup(77.8%).AsimilarincreaseinthepercentageofG0/G1wasob— tainedinculutringtoconfluencergoup(94.4%and89.6%、.Theserum starvationcellswerefullyreversiblewith 10%FBS(fetalbovineserum)afterseurmdeprivation24h.Whileusedthesefibroblastssnychronizedbyseurmde— privationorculutringtoconfluenceasSCNTdonors,therewasnosignificantdifferenceinthecleavageandblasto— cystdevelopmentrateofreconstructedoocytesoftworgoups(P0.05).Inconclusion,porcinefibroblastswereeffec- tivelysnychronizedatGo/G1stagesofthecellcyclebyseurm starvationorculturin

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