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卷 期 生 物 工 程 学 报
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增加植酸酶基因!#!$ 的拷贝提高其在巴斯德毕赤酵母的表达量
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罗会颖，黄火清，柏映国，王亚茹，杨培龙，孟 昆，袁铁铮，姚 斌
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中国农业科学院饲料研究所，北京 8###J8
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摘 要 为了进一步提高植酸酶的发酵效价，降低植酸酶生产成本，对毕赤酵母表达载体 :W9H\ L9 进行了改造。将表达载
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体:H]IM 的9U^8 启动子序列引入:W9H\ L9，使之成为甲醇可诱导型表达载体:9U^\ ，插入植酸酶基因 +;;7L8 后得到重组
! !
载体 。以染色体上带有一个拷贝的 基因、发酵效价可达到 $ 发酵液的重组酵母菌株 a
:9U^\ L +;;7L8 +;;7L8 % R _ 8# ]T‘ES %
!
为受体菌进行转化，在该重组菌株的染色体上的另一位点整合含有植酸酶基因的表达盒，经筛选到高表达植酸酶的重组子。
通过 进行验证，植酸酶基因被整合到重组酵母的染色体上，且受体菌中原有的植酸酶基因结构未改变。重组菌在 发
HI. S
酵罐经甲醇诱导 植酸酶蛋白表达量达到 发酵液，酶活性（发酵效价）达到 % 发酵液以上，较含单拷
8!#7 EB‘ES 8R! _ 8# ]T‘ES
贝植酸酶基因的受体菌株表达量有较大程度提高。HI. 检测及表达量分析证明改良的菌株具有很好的遗传稳定性和表达稳
定性。
关键词 植酸酶，载体改造，拷贝数增加，高效表达
中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ）
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