人工合成的GFMcry11B基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备.pdfVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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人工合成的GFMcry11B基因在大肠杆菌中表达、纯化及抗体制备.pdf

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业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12 (6): 714~7 19 ·研究论文· 人工合成的基因在大肠杆菌中表达、纯化及体制备* 1,2 1 1 1 1 2 敏王锋 ** 苏军陈志厚陈在杰孙明（1. 福建省业科学院农业遗传工程重点实验室，福州 350003; 2. 华中农业大学农业微生物农业部重点实验室，武汉 430070 ）摘要: 用限制性内切酶酶切的方法把人工合成的基因编码区克隆到原核达载体pGEX-4T-3 中，构建成重组表达质粒pGC 。在大肠杆菌( ) 中表达了GST-GFMCry1 1B 融合蛋白，达量约占菌体总蛋白的21%，其表达产物主要以包涵体的形式存在。对包涵体蛋白进行可溶性处理，用Glutathione Sephrose 4B 纯化出GST-Cry1 1B 融合蛋白。 Thrombin 酶切后得到Cry1 1B 蛋白，将其作为原免疫家兔获得了滴度（ELISA ）为1 ∶8000 的血清，并具有较强的特异性。关键词: 基因；原核表达；融合蛋白；多克隆抗体 Expression and Purification of GST-GFMCry 11B Fusion Protein in and Preparation of Polyclonal Antibody Against GFMCry 11B 1,2 1 1 1 1 2 DING Min WANG Feng ** SU Jun CHEN Zhi-Hou CHEN Zai-Jie SUN Ming ( 1. Fuji an Province Key Laboratory of Genetic Engineering for Agriculture, Fuj ian Academy of Agricultural Sciences. Fuzhou 350003, China; 2. Key Laboratory of Agriculture Microbiology, Ministry of Agriculture, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China) The coding region of , fully synthesized gene, was cloned into the multi-clone sites of pGEX4T vector to produce the recombined expression plasmid pGC by the methods of restriction enzyme digestion. The reco