表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(6):1244-1250 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.018 表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒 对小鼠免疫原性的研究 展小过，乔传玲，杨焕良，陈 艳，孔 维，辛晓光，陈化兰 （中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，哈尔滨 150001 ） 摘要：【目的】构建一株表达 H3N2 亚型猪流感病毒（SIV）HA 基因的复制缺陷型重组腺病毒，并测定其对小 鼠的免疫效力。【方法】以含有SIV A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)HA基因的重组质粒pMD18-H3HA 为模板，利 用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因，将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中，再次将含有H3HA及EGFP的基因 片段克隆到腺病毒的穿梭质粒 pDC315，构建重组穿梭质粒 pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒 pDC315-H3HA-EGFP 和腺病毒骨架质粒 pBHGloxΔE1,E3Cre 共转染 HEK293 细胞，基于腺病毒感染后形成的典型细 胞病变及 EGFP 基因在细胞中的表达筛选重组腺病毒 rAd-H3HA- EGFP。将重组病毒 rAd-H3HA-EGFP 以 108TCID 两 50 次接种6周龄的Balb/c小鼠，时间间隔为3 周，通过检测免疫小鼠的抗体水平及对病毒攻击的保护情况评价该重 组病毒的免疫原性。【结果】HA 基因已被重组到腺病毒的基因组中，并能够伴随病毒的复制而表达，表达蛋白具 有良好的生物性活性。重组腺病毒 rAd-H3HA-EGFP 经增殖、纯化后其 TCID 10 -1 8 可达 1.58×10 ·mL ，以 10 TCID 的 50 50 剂量免疫小鼠后，能够诱导产生高水平的特异性抗体，并对 H3 亚型 SIV 的攻击提供有效保护。【结论】构建了一 株具有良好免疫原性的复制缺陷型重组腺病毒，为H3亚型SI活载体疫苗的研制奠定了基础。 关键词：猪流感病毒；HA基因；重组腺病毒；小鼠；免疫原性 Immunogenicity of a Recombinant Adenovirus Expressing HA Gene of H3N2 Subtype Swine Influenza Virus in Mice ZHAN Xiao-guo, QIAO Chuan-ling, YANG Huan-liang, CHEN Yan, KONG Wei, XIN Xiao-guang, CHEN Hua-lan (Animal Influenza Laboratory of the Ministry of Agriculture/State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology/Harbin Veterinary Research