高致病性PRRSVORF3基因在昆虫细胞中的表达与免疫原性研究.pdfVIP

第32 卷 第6 期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol. 32 ，No.6 2010 年 6 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Jun. 2010 高致病性PRRSV ORF3 基因在昆虫细胞中的 表达与免疫原性研究 1,2 1* 1 1 1 1 1 1,2 徐明明 ，蔡雪辉 ，刘永刚 ，王淑杰 ，王洪峰 ，石文达 ，李丽琴 ，荣福龙 (1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001； 2. 东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030) 摘 要：为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3 的结构、功能和免疫学特性，本研究根据 GenBank 登录的高致病性PRRSV 变异株(HP-PRRSV) HuN4 株ORF3 基因序列，经序列分析去除其N 端的一部分 疏水性区域(1 aa ～49 aa) ，设计合成引物。将扩增的基因连接于pFastBac HTb 杆状病毒载体中，构建重组质粒 pF-ORF3 ，转化至感受态DH10Bac 中，获得重组杆粒rBac-ORF3 。再将其转染昆虫细胞 Sf9，获得重组杆状病毒 rAc-ORF3 。用western blot 和间接免疫荧光试验(IFA)分析表明GP3 在昆虫细胞Sf9 中获得正确表达，而且具有良 好的反应活性。用纯化的GP3 免疫小鼠，制备抗GP3 多克隆抗血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价。 本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达了重组GP3 ，经GP3 免疫的小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体，证 明表达的GP3 具有特异的免疫原性。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；ORF3 ；杆状病毒表达；免疫原性 中图分类号：S852.4 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2010)06-0455-05 Expression of highly pathogenic PRRSV ORF3 gene in insect cells 1,2 1* 1 1 1 XU Ming-ming , CAI Xue-hui , LIU Yong-gang , WANG Shu-jie , WANG Hong-feng , 1 1 1,2 SHI Wen-da , LI Li-qin , RONG Fu-long (1. Division of Swine Infectious Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China; 2 Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China) Abstract: To study the structure, function and immunogenicity of t