复合水产养殖环境中气单胞菌耐药性及其同源性分析.pdfVIP

中国水产科学 2014年 7月，2l(4)：777—785 JournalofFisherySciencesofChina 研 究论文 DoI：1O．3724／SP．J．1118．2014．00777 复合水产养殖环境中气单胞菌耐药性及其同源性分析 黄玉萍 一，邓玉婷 ，姜兰 ，谭爱萍 ，吴雅丽 ，王伟利 ，罗理 1．中国水产科学研究院 珠江水产研究所，农业部渔用药物创制重点实验室，广东省免疫技术重点实验室， 广东 广州， 510380； 2．上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306 摘要：从广东省佛山市 4个不同畜禽．鱼复合养殖场采集分离猪 ／鸭源 、鱼源 、水源、泥源气单胞菌 eromonas)共 57株，通过 K．B药敏纸片法，测定其对 8类 24种药物的敏感性；提取基因组 DNA，进行肠杆菌基因间重复序列 PCR(ERIC．PCR)及脉冲场凝胶 电泳(PFGE)分子分型。57株气单胞菌对氨苄西林 、阿莫西林 ／克拉维酸 、利福平具 有较高耐药率；不同菌株间存在耐药谱差异。57株气单胞菌通过ERIC—PCR分型，可分为24个基因型；采用 PFGE 分型可分为 46个簇。两种分型方法均发现来源于同一养殖场的菌株存在相 同或相似图谱的分离株，并且有相似的 耐药谱，提示此为同一克隆株。实验结果表明，ERIC．PCR及PFGE分子分型技术均适用于气单胞菌的相关性分析 及其耐药性克隆传播追踪：复合水产养殖环境有可能有利于耐药菌从畜禽向水产养殖环境转移 。本研究通过对不 同来源气单胞菌进行耐药性分析及溯源追踪， 旨在为规范畜禽．鱼复合养殖模式用药及建立健康的水产养殖模式 提供参考 。 关键词：气单胞菌；复合养殖；耐药性；PFGE；ERIC．PCR；克隆传播 中图分类号：$94 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2014)04—0777—09 气单胞菌 eromonas)是广泛分布于 自然界的 式缓解了用地压力增加了经济效益，但是忽视了 人一畜一鱼条件致病菌，近年来由其引发的水产动 微生物带来的生态影响，对生态环境造成了极大 物暴发性死亡各地多有报道。随着抗菌药物在畜 的污染。畜禽粪便中携带的耐药菌或残留抗菌药 禽及水产养殖中普遍性应用，气单胞菌耐药状况 有可能通过上述方式而影响水生动物微生物菌群 Et趋严重 ¨J。在中国珠三角地区[6-7]和东南亚 、 的药物敏感性，从而造成耐药菌群在不同养殖群 南亚地区 -9]存在一种对资源多重利用的复合水 落间传播和扩散，加促了耐药菌的选择性演变， 产养殖模式(立体养殖模式)，较常见的是猪．鱼模 对抗菌药的研发使用发出了新的挑战。 式、鸭一鱼模式、猪一鸭一鱼模式。该模式在鱼池边 基于PCR技术的肠杆菌科细菌基因问重复序 上修建鸭寮或猪棚，将鸭粪或猪粪直接排入鱼池， 列聚合酶链式反应 (EnterobacterialRepetitiveIn— 补充池塘中浮游生物生长所需的氮、磷等营养源。 tergenic Consensus Polymerase Chain Reaction， ERIC．PcR1分子分型方法由于其快速、简便、易 这种 “以饲喂畜(禽)，畜(禽)粪肥水，肥水养鱼” 的新兴农业模式既减少了粪便对环境的污染，又 操作等优点在细菌分型中得到普遍应用。脉冲场 节省了饲料。伴随着畜牧业的发展，虽然这种模 凝胶 电泳(PulsedFieldGelElectrophoresis，PFGE) 收稿 日期 ：2013．12．15；修订 日期：2014．O1．16． 基金项 目：国家 自然科学基金青年项 目；广东省 自然科学基金博士启动项 目(S2O13O4o013O7O)；公益性行业(农业) 科研专项 (201203085)． 作者简介：黄玉萍(1988一)，女，硕士研究生 ．E-mail：hyp．ch@163．tom 通信作者：姜兰，研究员．E-mail：fanjianglan@hotmail．com；邓玉婷，副研究员，博士．E—mail：fourden