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Dot-ELISA 方法在犬流感病毒临床诊断中的应用 刘春晖 陈翠翠 遇秀玲 (北京天恩泰生物科技有限公司) 摘要： 近十年来关于犬流感病毒的研究越来越多。随着与人类密切接触的宠物犬饲养数量的急 剧增加，犬流感诊断和防控的重要性日渐凸显，如何简便、快速进行诊断或将成为宠物犬主 人关注的焦点。因此，本文就流感病毒的流行现状和 Dot-ELISA 在流感病毒临床诊断中的 应用作简要介绍。 Dot-ELISA 是基于酶联免疫反应原理，采用双抗体夹心法原理检测甲型流感病毒核蛋白 抗原的一种快速诊断方法。目前已有北京天恩泰生物科技有限公司的产品可应用于宠物犬的 临床诊断。通过与病毒分离和核酸检测方法比较显示，该产品敏感性好，仅略低于病毒分离 方法，与核酸检测结果相似，灵敏度比美国BD Directigen 公司的A 型流感病毒胶体金试纸 条高10 倍。特异性高，不与犬源其他病毒反应。产品操作简便、快速，20 分钟左右即可肉 眼判读结果。 关键词：流感、流行病学、检测方法、Dot-ELISA 1 流感病毒简介 流感又称流行性感冒，是由流感病毒（Influenza Virus ，IV ）引起的人和多种动物的一 种急性、热性、高度接触性传染病。国际动物卫生组织将其规定为 A 类动物疫病，我国也 [1] 将其列为一类动物疫病 。 流感病毒属于正黏病毒科，正黏病毒科分5 个属，即甲型、乙型、丙型、托高土病毒属 [2] 以及鲑传贫病毒属 。甲、乙、丙三种类型流感病毒的主要区别在于其核蛋白（NP ）与基 [2] 质蛋白（M ）抗原性的不同 。对流感病毒抗原进行检测时，检测的就是流感病毒核蛋白抗 原，因而可以区分甲、乙、丙型流感。 甲型流感病毒可以感染人和多种动物，致病性最强且最常见。乙型流感只感染人，且症 [3] 状较轻。丙型较少见，多为散发病例 。甲型流感病毒有两种主要的表面标志性抗原，分别 称为血凝素（HA ）和神经氨酸酶（NA ）。根据HA 和NA 抗原性的不同，流感病毒被分为 16 种H 亚型（H1～H16 ）和9 种N 亚型（N1~N9 ），就是我们平时所说的H*N*[1,2] 。感染 [4] 犬的甲型流感病毒主要有H1N1、H3N8 、H5N1、H3N2 共4 种亚型 。 2 流行病学 从19 世纪80 年代开始，陆续有关于人流感大流行的报道，造成数以千万的人口死亡。 2013 年1 月14 日，美国的流感季提前暴发，全美 50 州已有 47 州出现重大疫情。全美感 染人数已增至2800 多人，至少有20 名儿童死于流感。2008 年以来，我国已有多例甲型流 [5] 感导致人死亡的病例报道。感染人的甲型流感毒株主要有H1N1 、H2N2、H3N2 亚型 。 近些年，甲型流感病毒感染犬的报道频繁出现，包括H1N1、H3N8 、H5N1 、H3N2 共4 [4] 种亚型 。2004 年，美国佛罗里达州确诊22 只犬感染了H3N8 亚型流感病毒，截止到2009 [6,8] 年5 月美国已有30 个州发现犬流感的存在 。2012 年，Hyekwon 等人研究证实H3N2 流 [7] 感病毒可在犬和猫的种间及种内传播 。华南农业大学李守军等2011 年从107 份犬鼻咽拭 [9] 子样品中分离获得3 株H3N2 亚型犬流感病毒 。甲型H1N1 亚型人流感大流行期间，中国 农业大学孙莎莎等，在该校动物医医院从 804 份犬鼻咽拭子样品中，检出 6 份样品呈甲型