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业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14 (1): 17~21
·研究论文·
人肥胖基因在大肠杆菌中的表达及生物学活性检测*
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奋攻 赵春江 李 宁 ** 吴常信
(1. 中国农业大学生物学院，农业生物技术国家重点实验室，北京 100094)
(2 . 中国农业大学动物科技学院，北京 100094)
： 、繁殖、造血及体重调节等方面具有重要功能。利用
摘要 肥胖基因( )编码的瘦蛋白可以反映机体脂肪含量信息，在发育
PCR 方法扩增去除信号肽的人肥胖基因cDNA 序列，并将位于基因5 端的CCC 转变为大肠杆菌( )常用密码
经 ，
CCG ，扩增片段经测序证实后，克隆到原核表达载体pET5a ，重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) ， 0.1 mmol/L IPTG 诱导
获得分子量约为16 kD 的特异蛋白表达带，表达量最高占菌体蛋白总含量的55%。重组蛋白纯化后，注射昆明白小白鼠，小白
鼠体重明显下降，说明纯化的重组蛋白具有生物学活性。
关键词：人肥胖基因；大肠杆菌；表达；活性
中图分类号: S188 文献标识码: A 文章编号: 1006-1304(2006)01-00017-04
Expression of Human Gene in
and Determination of the Recombinant Protein Bioactivity
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XI Fen-Gong ZHAO Chun-Jiang LI Ning ** WU Chang-Xin
Leptin has very important functions in regulation of mammals ’ development, propagation, blood reproduction and
body weight. Here, a 456-bp fragment of human cDNA encoding ob mature protein without signal peptide part was amplified. A
codon CCC in 5 end of the gene was replaced with CCG, which was used frequently in . And then the fragment was
cloned into an expression vector named as pET5a and the proper ligation of the vector was confirmed with s
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