应用技术——利用MD高内涵系统进行活细胞和心肌细胞功能研究.pdfVIP

利用 ImageXpress Micro进行长时间活细胞成像和心肌细胞功能评价 活细胞成像技术是最近几年兴起的一项技术，能够在细胞接近生理的状态下观察细胞形 态改变和蛋白的表达，该技术能够避免传统采用固定细胞或组织的研究方法中，固定细胞过 程中造成的细胞形态的改变和结构改变，能够更加真实的反映出细胞的特性，因而广受推崇。 MD ImageXpress Micro 高内涵系统具有多种特性能够进行长达数天的活细胞的观察，同时， 由于采用著名的MD 软件产品MetaMorph 为基础的MetaXpress 高内涵分析软件，具有极高 的灵活性和扩展能力，除活细胞成像之外还能够能够对某些细胞 （如心肌细胞）的生理药理 特性进行评价。 神经细胞长时间成像 神经细胞是公认的较为敏感和脆弱的细胞，对于外界环境较为敏感。对于活的神经细胞 的长时间培养和观察具有较大困难。采用ImageXpress Micro 系统能够实现神经细胞的长时 间观察培养。 方法： 从新生大鼠大脑海马获得约 1 立方毫米大小组织块。移入含有 0.25%胰酶的离心管中 37℃，5%CO2 孵育箱内消化20～30 min 。加入含胎牛血清的培养液终止消化，离心重悬细 5 胞，按0.6 ×10 /ml 铺于96 孔板中。24 h 后换为NeurolbasalMedium/B27 无血清培养液， 以后每2~3 d 半量换液1 次。7 d 后获得原代神经细胞。 图像获取： 将样品放入有环境控制功能的MD ImageXpress Micro 高内涵系统内，采用激光自动聚 焦进行样品聚焦，在10X 物镜下每隔5 分钟进行一次相差图像拍摄，结果如下： 图1. 用ImageXpress Micro 进行神经细胞的长时间观 察培养，观察时长50 小时 图2. 图1 中的细胞观察50 小时后，取出换液后，继续 进行观察，观察至120 小时。 小结： ImageXpress Micro 采用的环境控制系统能够维持细胞所需的温度、湿度和CO2 条件， 其中温度为细胞的酶活性提供了温度保障，确保细胞的生理机能，湿度维持能够保证细胞外 液不会蒸发，避免了胞外渗透压的升高造成的细胞脱水，CO2 能够维持细胞外液的pH 值。 除了维持细胞的生存环境外，在进行敏感、脆弱细胞（如神经细胞）的长时间观察过程 中，最为重要的是减小对细胞的刺激，尽可能的保持细胞的活性。ImageXpress Micro 采用 激光自动聚焦技术，在聚焦的过程中，细胞无需受到光照，这样就避免了细胞内的光化学反 应和光照升温，能够很好的维持细胞的活性状态。因此，在长时间活细胞的观察过程中，以 上两点不可或缺。 心肌干细胞细胞的功能评价 ImageXpress Micro 采用的软件系统功能强大，具有无限的扩展功能。因此，除了能够 实现活细胞的长时间观察和细胞的形态、蛋白表达等分析，ImageXpress Micro 还能够实现 细胞功能学的评价。 干细胞研究是目前生物学研究的热点，采用人类的干细胞（如心肌干细胞）能够加快研 究的速度，同时还能够真实反映人体细胞的功能，还能加快药物进入临床的速度。iPS 来源 的心肌细胞因其表达的离子通道、自发节律特性、与原代心肌细胞特性相似的特性尤其引人 注目，通过该细胞可以进行心肌细胞特性的研究，并能缩短药物筛选的时间与临床前实验的 周期。 方法： 采用Cellular Dynamics 公司的iPS 来源的心肌细胞，将其铺于96 孔板，并在培养液中 孵育2-7 天，以Calcein AM 孵育10 分钟，将培养液弃去后，加入不同浓度的激动剂和抑制 剂。 图像获取和结果： 心肌细胞的成