绿色荧光蛋白的研究.pdfVIP

《生物工程进展》1997, . 17, . 4 V o l N o 绿色荧光蛋白——现代细胞生物学与分子 生物学研究领域的新标记物 岳莉莉　齐义鹏 (武汉大学病毒学研究所　武汉 430072) 摘要　从多管水母属A equ oren v ic tu r ia 分离出的绿色荧光蛋白(GF P ) , 因其特有的生物 化学性质及该基因在异源细胞内的表达产物亦能产生强烈的绿色荧光, 使其在现代细胞 生物学和分子生物学研究领域的应用具有广阔前景。本文就其研究进展及其应用进行简 要综述。 关键词　GF P　荧光　基因表达　突变株　应用 　　基因的表达或蛋白质的定位及时序的变化 整体发光及其提取的颗粒都是呈绿色, 推测其 常需要用荧光物质作为标记。这种标记也是免 粗提液中一定还有一种蛋 白即绿色荧光蛋 白 疫荧光和免疫组化的基础。传统的荧光标记是 ( , ) [ 1, 2 ] 。 g reen f luo re scen t p ro tein GF P M o r ise 通过纯化蛋白质再共价结合到荧光染料上, 但 [3 ] 等 对 GF P 进行了分离和纯化, 他们的实验结 是化学计量和染料附着的部位难于控制, 因此 果表明, GF P 的荧光发射峰在 509nm , 最大激 尚需再次纯化。若该蛋白需用于活细胞内检测, 发波长为 395nm , 并在 475nm 处有一肩峰。当 最关键的问题是如何使其通过细胞膜。现在可 将 Ca2+ 加入到含低浓度 GF P 的aequo r in 溶液 用分子生物学的方法产生荧光蛋白, 以取代传 中时, 光谱接近于 aequo r in 发射的蓝光( m ax 统的标记方法。常用的有荧火虫和细菌的荧光 472nm ) ; 而将 aequo r in 和 GF P 按大 自然比例 素酶基因, 但由于它们都需要底物和辅助因子, 混合时, 加入 Ca2+ , 则光谱接近于活体的发射 因而在活体组织中的应用受到限制。由于绿色 光(m ax 509nm ) 。推测在活体内, GF P 通过荧 荧光蛋白所特有的生物化学性质, 且该基因在 光素酶或钙活化光蛋白的能量转换过程, 吸收 异源细胞内的表达产物亦能产生强烈的绿色荧 蓝光而后发出强烈的绿色荧光。 发光 A equo rea 光, 使其在生命科学中的应用具有美好的前景。 系统分子间的能量转换过程如下: 本文就其研究进展进行简要综述。 Ca2+ A equo r in B F P + b lu e L igh t 　　一、绿色荧光蛋白的生物发光现象 GF P ↓ GF P + 激发