猪链球菌国内分离株精氨酸脱亚氨酶的克隆表达及其活性分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ’(% ) ’(! 年 月 日 $%% % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! *+,-./0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 猪链球菌国内分离株精氨酸脱亚氨酶的克隆表达及其活性分析 张金秋，陆承平 （南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 南京 $%%1# ） 摘 要：根据 上精氨酸脱亚氨酶（ ， ）序列 ，设计并合成一对引物，用 检测 K/B49BL 90MBB/ E/=B9N/ OP O8#!(’(! Q3R 株猪链球菌和 株马链球菌兽疫亚种的 基因，发现 株猪链球菌均能检出此基因，而 株马链球菌兽疫亚 $1 ! $1 种均未检出。扩增出的猪链球菌 型（ ）强毒株 的 基因片段，定向克隆至 严紧型质粒 $ SS$ TO1’% ! @4OP7 #$%;TN3 并转化 。阳性重组菌经 阿拉伯糖诱导，表达出分子量约 的重组蛋白。经镍柱亲和层析，获得纯化 5*Q% U; !%%%P9 的重组酶。活性分析显示，该酶具有巯基酶和金属酶的特征，其最适反应温度为 ，最适 值为 。 2 V @T ( W# X/N,/0B .6-, 分析显示，该酶能与SS$;TO1’% 全菌制备的兔抗血清发生特异性反应，表明其具有一定的免疫原性。检测该 酶有助于进一步分析猪链球菌可能的毒力因子。 关键词：猪链球菌；精氨酸脱亚氨酶；克隆表达；酶活 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） S’#$ Y12( O %%%;($%1 $%% %#;%’(%;%# 猪链球菌（ ）根据其荚膜多糖抗 同源性，并具有精氨酸脱亚氨酶活性，故命名为猪链 ’()* ’+%+%%,- -,.- ［ ］ ) 2 球菌的精氨酸脱亚氨酶（ 原性的不同，可分为 个血清型（ ， ） ， ， ）。国 2#