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　第 25卷 武 　夷 　科 　学 Vo l. 25　 2009年 12 月 WU Y I SC IENCE JOURNAL D ec. 2009 ( ) 文章编号 : 100 1 4276 2009 0 1009704 总 RNA 提取方法的比较与分析 林玲 ,杨燕凌 ,何海福 ,汪世华 ( ) 福建农林大学生命科学学院 ,福建 福州 350002 摘要 : 　用 TR IZOL 法 、CTAB 法和改良的热硼酸盐法从水稻叶片中提取总 RNA ,结果表明用这三种方法提取 总 RNA 的 OD260nm /OD280nm 值分别为 1. 896、1. 992和 1. 657。琼脂糖电泳表明 ,用改良的热硼酸盐法提取 的 RNA 降解严重 ,用 TR IZOL 法提取的总 RNA 有部分降解 ,而 CTAB 法提取的总 RNA 完整 、未降解 ,可用于 后续实验 。因此 CTAB 法更适于从水稻叶片中提取总 RNA 。 关键词 : 　总 RNA ;提取 ; CTAB 法 中图分类号 : 　Q522　　文献标识码 : 　A 总 RNA 提取是分子生物学研究的基础实验之一 ,在进行 Northern杂交分析 、cDNA 文库构 建 、cDNA 末端快速扩增 、等研究时均需要高质量的 RNA [ 1 - 12 ] 。植物组织总 RNA 的提取较动 物和微生物困难 ,原因是植物具有坚硬的细胞壁 ,富含多种次生代谢物 ,细胞破碎后 ,这些物质 将以不同方式干扰 RNA 的提取 [ 2 ] 。另外 ,细胞内的 RN a se 以及操作体系中的 RN a se均会对分 离组分中的 mRNA 进行降解 。常见的的总 RNA 提取方法有苯酚法 [ 7 ] 、阴离子去污剂法 [ 8 ] 、 L iC l - 尿素法 [ 9 ] 、改良的 Gom ez法 [ 10 ] 、异硫氢酸胍法 [ 3 ] 、CTAB [ 4 ] 法 、热硼酸法及改 良热硼酸 法 [ 5 ] 、TR IZOL 试剂快速提取法 [ 13 ] 。本研究比较了 TR IZOL 试剂快速提取法 、CTAB 法和改良 热硼酸法 , 以其找到快速并能得到高质量的总 RNA 提取方法 ,为后继实验奠定基础 。 1　材料与方法 1. 1　材料 水稻叶片采 自福建农林大学 田间实验室 , 立即用液氮冻存于 - 70 ℃。焦碳酸二 乙醋 (D EPC) 、TR IZOL 试剂购 自宝生物工程有限公司 。其它为国产分析纯试剂 。所有玻璃器皿于 0. 1%D EPC水中浸泡过夜 ,于 200 ℃干烤 6 h;所有塑料离心管灭菌后 ,于 0. 1% D EPC 水中浸 泡过夜 ,然后 1. 034 ×10 Pa灭菌 30 m in , 以去除残存的 D EPC,取出后尽快烘干 ,一次性枪头用 前经 1. 034 ×10 Pa灭菌 30 m in , 电泳槽用前用 3%双氧水浸泡 2 h ,然后用 0. 1% D EPC水冲洗 ( ) 晾干 ; 比色皿用甲醇 /浓盐酸 1: 1 混合液浸泡 1 h。 1. 2　实验方法 TR IZOL 试剂快速提取法 [ 13 ] : 50 m g水稻幼叶研磨后加入 1 mL RNA iso和 R eagen t后匀浆 , 收稿日期 : 2009 - 03 - 10 ( ) ( ) 基金项 目: 福建省自然科学基金项目 2007J0243, X0750005 、福建省教育厅科技计划项目 JA07059 。 作者简介 :林玲 ,女 , 1982 ( -