抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达.pdfVIP

张学敏等抗／菌肽在大肠杆蓖中的融合表达●匝 antimicrobialpeptideswithfusionprotein，whichcannotonlyavoidthelethaleffecttowardsthehost，butalsoprotectthe peptidefrom degradationbyproteases．Combinedwith ourresearch，thepresentarticlereviewstheprogressoffusion vector，cleavagemethodsandoptimizationoptionsforantimicrobialpeptidesproductionwithfusionproteininEscherichia coli． Keywords： antimicrobialpeptides，carrierprotein，fusionexpression，cleavagemethods，conditionoptimizing 抗菌肽是 由生物防御系统产生的一类小分 和表达成本低等优势 ，但其也具有翻译后加工 子肽类物质Ll】，通常 由10—50个氨基酸组成，大 修饰体系不完善 、表达产物的生物活性较低等 多带有一定量的正电荷。抗菌肽具有广谱抗菌 弱点 5【1。鉴于抗菌肽分子量较小，且基本不需要 活性 ，对细菌 、真菌及一些包膜病毒都表现出 翻译后的加工修饰，所以综合考虑大肠杆菌表 显著活性 ，而且抗菌肽主要与微生物膜作用 ， 达系统应是抗菌肽重组表达的第一选择。 阻碍了微生物产生抗药性的能力。由于抗菌肽 另外 ，抗菌肽一般是阳离子小分子多肽， 本身的优势 ，它作为一种新型抗生素引起了人 它极易被蛋白酶降解 ，且对宿主细胞具有一定 们广泛的兴趣 ，低成本生产大量抗菌肽是对其 的杀伤作用 ，因此在抗菌肽异源表达时经常会 进行基础研究及广泛应用的前提。重组 DNA技 将 目的肽与融合载体连接 ，融合载体的作用类 术为蛋 白生产提供了一种经济有效的方式 ，许 似于天然抗菌肽产生过程中能够保护抗菌肽及 多抗菌肽已经通过基因重组技术在多种异源宿 宿主细胞的前导肽部分 ，在生物合成中保护肽 主中成功表达 [2】，如酵母、昆虫、大肠杆菌等。 和宿主免受伤害I6]。融合蛋 白形成以后 ，可以通 酵母表达系统具有完备的基 因表达调控机制和 过酶解法或化学裂解方法进行切割 ，然后进一 对产物的加工修饰能力 ，毕赤酵母表达系统是 步分离纯化获取抗菌肽。在大肠杆菌中常用的 其中的典型代表 ，该系统表达的抗菌肽多为分 载体蛋 白主要包括两类 ：促进可溶性表达的载 泌表达，产物对宿主菌没有明显的抑制作用 ， 体蛋 白和促进包涵体形成的载体蛋 白。此外 ， 但存在着表达效率低 、发酵周期长和易污染等 自身可 降解蛋 白和信号肽由于可 自动切割标 弱点[3]。昆虫表达系统是另一类应用广泛的真核 签 ，引导分泌表达 ，亦可分别作为载体蛋 白应 表达系统 ，如以杆状病毒为载体 ，在 昆虫细胞 用[。本文结合课题组的研究工作 ，综述了近年 Sf-9中表达抗菌肽 Shiva—la[4J，该表达系统具有 来抗菌肽在大肠杆菌体系中重组表达使用的融 同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰、加 合载体 、融合蛋白的裂解方法及表达条件优化 工以及转移外源蛋 白的能力，蛋 白表达水平较 的研究进展。 高、成本低 ，但缺点是翻译后加工修饰体系操 1协助抗菌肽可溶性表达的载体蛋白 作繁琐 5【]。大肠杆菌是表达异源重组蛋 白应用最 为广泛的宿主，与酵母表达系统及 昆虫表达系 硫氧还蛋白是一个常用的分泌表达抗菌肽 统相 比，大肠杆菌表达系统具有能在较短