新型疫苗肽IA-2-P2对1型糖尿病的治疗作用.pdfVIP

药 物 生 物 技 术 PharmaceuticalBiotechnology 2014，21(4)：293～296 293 新型疫苗肽 IA一2—12对 1型糖尿病 的治疗作用 吴 洁 ，申丽丽，黄东成，金 亮，李国梁，刘坤锋，杨 雪，刘晓锐 (中国药科大学 生命科学与技术学院 微基因药物实验室，江苏 南京 210009) 摘 要 IA．2．P2是由来 自P277多肽的T表位与胰岛素瘤相关蛋白2(IA．2)的B表位组合而成的新疫苗肽， 为验证其对 1型糖尿病的治疗效果 ，采用多次小剂量注射链脲佐菌素 (STZ)诱导C57BL／6雄性小鼠建立 1型糖尿 病模型，成模2W后，sc100Ixg多肽进行免疫治疗，间隔3W免疫 ，共6次，每3w收集被免疫动物的血清进行生化 分析 ，测定血糖浓度和IgG抗体滴度并进行体重监测。结果显示 IA一2一P2多肽能在一定程度上降低血糖，与对照 组相 比，IA．2．P2组终末平均血糖下降38％；并能维持小鼠的体重的稳定；多肽治疗能延长小鼠生存时间，在 32W 观测期间，IA一2．P2组小鼠生存率达 70％，较对照组40％的生存率有显著差异 (P0．05)；并且具有免疫调节作 用 ，ELISA结果显示多肽可以有效引起免疫应答产生，与对照组相比，抗体水平有显著差异 (P0．05)。 关键词 1型糖尿病 ；链脲佐菌素；疫苗；血糖 ；免疫；抗体 中图分类号 Q516；R587．1 文献标志码 A 文章编号 1005—8915(2014)04·0293-40 1型糖尿病是由自身免疫性T细胞对胰岛B细胞进行 心，许可证号 ：SCXK(Su)2012—0004；IA-2--P2、P277多肽 由 攻击造成胰岛素分泌不足而导致持续高血糖症状的自身免 上海吉尔生化合成，HPLC检测纯度 90％；STZ购 自Sigma 疫性疾病 J。截止到 目前还没有根治该疾病的方法 ，患者 公司；快速检测血糖仪及试纸购自台湾博士珑，血糖仪型号 需要长期注射胰岛素以控制血糖，另外 ，长期高血糖会诱发 GLM-77；羊抗鼠二抗 IgG购买 自武汉博士德公司；其他试剂 一 系列并发症如糖尿病肾病、糖尿病眼病等。近年来，随着 均为国产分析纯。 对 1型糖尿病的发病机制研究越来越深入，一些 自身抗原 1．2 方法 相继被确定：GAD65，HSP60，IA一2等等都是 T细胞的靶点 1．2．1 1型糖尿病模型建立 4W龄C57BL／6雄性小鼠于 抗原 J，基于 自身抗原开发的疫苗具有低毒、靶向、易于生 清洁级动物房饲养 ，12h光周期，恒温22℃，湿度60％，经 产储藏等优点 ，因而被广泛研究。P277多肽是来 自于 一 周适应 ，按40mg／kg剂量连续5d腹腔注射 STZ柠檬酸 HSP60上的24个氨基酸序列，在 NOD小 鼠中表现出显著 溶液。第一次注射STZ前，小 鼠过夜禁食 12h，之后每次注 的抗 1型糖尿病作用，目前基于P277开发的抗糖尿病疫苗 射STZ前禁食4h。最后一次注射后 3d，7d测量空腹血 DiaPep277正开展 3期临床实验 。 糖 ，采用小鼠尾静脉全血快速血糖测定法动态监测空腹血 我们课题组前期研究发现，P277的P2片段(IPALDSLT— 糖 ，以连续2次血糖值≥11．1moL／L判断为成功模型。 PANED)是免疫预防1型糖尿病的关键表位。胰岛素瘤相关 1．2．2 多肽免疫 糖尿病小鼠随机分为3组，分别是对照 蛋白2(IA-2)为 自体胰岛抗原 ，近年有报道发现 IA-2的免疫 组、IA-2一P2多肽治疗组 、P277多肽治疗组 (阳性对照)，每 疗法对 1型糖尿病有预防作用 。本实验中选用 IA-2近膜 组 10只。1mg多肽与40mg甘露醇溶于 1mL20％力保肪 区 JM2 的两 个 线 形 B表 位：IA一2 的 626～630位 宁(Lipofunding)配成注射剂 ，于造模后 的第 2，5，8W，每