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重庆医学 2009 年 12 月第 38 卷第 24 期 3 157
·实验研究 ·
粪便基因组 DN A 提取方法比较及在沙门菌定量 PCR 检测中的应用
岳昌武 , 吕玉红 ,刘坤祥 ,陈公安
(遵义医学院中心实验室 ,贵州 563003)
摘 要 : 目的 建立并优化 1 种可用于临床微生物检测的粪便微生物基因组 DN A 提取方法并应用于沙门菌定量 PCR 快速
检测 。方法 分别利用土壤微生物基因组 DN A 提取试剂盒法 、微生物基因组 DN A 提取试剂盒法和本实验室改进酚/ 氯仿抽提
法提取腹泻患者粪便基因组 DN A ,根据沙门氏菌 16 srDN A 、d T 等基因或 DN A 功能区序列设计 PCR 引物 ,进行多基因定量 PCR
检测 。结果 3 种方法提取的基因组 DN A 均可进行有效的定量 PCR 扩增 ,采用所建立的多重 PCR 方法可特异鉴别粪便沙门氏
菌 。结论 本研究改进的粪便基因组DN A 提取方法及临床微生物的定量 PCR 检测可在较短的时间内实现对大量临床样品快速
诊断 ,有一定应用前景 。
关键词 :基因组 DN A 提取 ;粪便 ;定量 PCR ;沙门菌
( )
中图分类号 :R378. 22 ;R446 . 13 文献标识码 :A 文章编号 : 167 18348 2009 243 15703
Comparison of three protocols f or extraction of total fecal D NA and identif ication of Salmonella with real time PCR
Y UE Changw u , L U Yuhong , L I U K unx i ang , et al .
( )
Cent ral L ab of Z uny i M e d ical Col leg e , Z uny i , Guiz hou 563003 , Chi na
Abstract :Objective To investigat e t he effect s of different fecal DN A ext raction met hods on t he molecular analy si s of t he diver
sit y of getting diarrhea . Methods Three p rotocol s were u sed to ext ract tot al DN A f rom one fecal samp le of an adult wit h diarrhea .
The p roduct s of DN A were evaluat ed by agaro se gel elect rop horesi s and t hen amp licon s of 16 S r RN A gene and d T ferment ation of
t he t hree DN A i solation p rotocol s
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