人神经生长因子成熟肽在昆虫细胞中的表达和活性测定.pdf

摘要 摘要 神经生长因子(nervegrowthfactor，NGF)是神经系统最重要的生物活性分 子之一，兼有神经营养因子与促进神经突起生长双重作用，对神经细胞的生长、 发育、分化发挥调节作用，是参与损伤神经再生和功能修复的重要因子。同时， 它还参与调节免疫和造血等非神经系统的功能。 NGF在人体组织中含量极微，已有报导从胎盘中纯化hNGF，但其组织来 源有限，成本高产量低，不能满足对bNGF的需求。利用基因工程方法获得有 生物学活性的hNGF制品，对其基础理论研究和临床应用具有重要的意义。 Bac．to．Bac系统是一种新颖的杆状病毒表达载体系统．构建及筛选重组病毒比传 统的杆状病毒表达系统更为高效简单快捷，业已成为研究真核基因表达较为理想 的工具。 扩增出成熟肽B=NGF基因片段。PCR产物经双酶切后与经同样双酶切的转移载 行测序。测序结果正确后，提取该重组质粒转化进入含有穿梭载体B鲫mid的受 rBacmid．BNGF。再将这一重组穿梭载体转染贴壁培养的昆虫细胞St9，得到重组 后培养上清和细胞总蛋白进行SDS．PAGE电泳分析，结果显示感染细胞总蛋白 在14．6kDa左右有一表达带而其培养上清及正常培养