人运动神经元生存蛋白Tudor功能域片段的克隆，表达.pdfVIP

天津医科大学硕士研究生论文中文摘要 摘 要 目的：构建含有人SMNTudor基因片段的原核表达质粒，并在大肠杆菌中 大量表达，从而与p100Tudor片段结构和功能进行比较． 方法俐用聚合酶链反应口cR)方法，扩增出人SMNTudor基因序列，并 与原核表达载体pGEX-4T-1连接形成重组质粒转化至作为质粒的宿主菌大 肠杆菌BL21株中，经IPTG诱导融合蛋白表达并用还原型谷胱甘肽s转移 酶特异性结合球珠纯化融合蛋白。用同样的方法表达p100Tudor蛋白片段 融合蛋白。SMN Tudor融合蛋白分别与HeLa细胞 Tudor融合蛋白与p100 核裂解液中蛋白结合，并进行比较． 结果：PeR法获得SMN Tudor基因序列，长度为183bp，成功构建了表达 载体pGEx的重组质粒。重组质粒pGEX-4T-SMNTudor经PCR鉴定，酶 切鉴定和测序后在大肠杆菌BL21株中成功表达GST-SMNTudor融合蛋白． Tudor片段与SM／q 通过比较可以看出p100