鲤鱼金属硫蛋白基因启动区功能的研究3.pdfVIP

动物学报 　43 (2) : 197～203 , 1997 A cta Zoologica S inica 　　　　　　 鲤鱼金属硫蛋白基因启动区功能的研究 李　辉　刘冬梅　剧冬红　贾雅莉　沈孝宙 ( 中国科学院动物研究所, 　北京　100080) 沈俊宝　孙效文　阎学春　梁利群　王　鹏 ( 中国水产科学研究院黑龙江水产科学研究所, 　哈尔滨　150073) 摘 　要 　以氯霉素乙酰化酶作为报讯基因 , 利用草鱼肾培养细胞瞬时表达系统 , 对已克隆 ( ) 的鲤鱼金属硫蛋白 M T 基因5 ’调节区 16kb 的序列进行了功能分析。从顺式效应和反 式效应研究证明 : 所克隆的鲤鱼 M T 基因 5 ’调节区具有典型 M T 启动子的特性。实验发现 哺乳动物病毒 SV40 增强子可以加强鱼类 M T 启动子的活性 , 提示在系统进化上鱼类基因不 但存在增强子元件 , 并具有与哺乳动物增强子相似的作用方式 , 而且作用于增强子的反式 效应因子也存在一定的同源性。 关键词 　鲤鱼金属硫蛋白基因 　SV40 增强子 　草鱼肾培养细胞 　氯霉素乙酰化酶 　瞬时表 达系统 转基因鱼的研究具有很大的价值 , 这不仅是由于转基因鱼未来的经济潜力 , 且作为 真核基因调控研究的模型 , 也有许多优越性。然而至今可用于转基因的鱼类基因调控元 ( ) 件 element 仍然很少。在国外 , 已研究过的鱼类基因启动子只有虹鳟鱼金属硫蛋白 ( ) ( ) β (β ) ( metallothionein , M T Zafarullah et al . , 1988 , 鲤鱼 肌动蛋白 actin Liu et ) ( ) ( ) al . , 1990 和美洲鲽抗冻蛋白 antifreezing protein Gong et al . , 1995 三种。我国 转基因鱼的研究开始最早 , 但有关鱼类基因调控元件的研究则尚属空白。 ( ) 作者利用氯霉素乙酰转移酶 chloramphenicol acet yltransferase , CA T 作为报讯基 ( ) ( ) 因 reporter , 建立瞬时表达系统 , 分析了我们所克隆的鲤鱼 Cyprinus carpio 基因 5 ’调节区在草鱼 ( Ctenopharyn godon idell us) 肾培养细胞中的功能, 并与其它 M T 启 动子 (虹鳟鱼和小鼠 M T 启动子) 进行了比较 , 同时还研究了异源的哺乳类病毒 ( simian virus 40 , SV40) 增强子对鲤鱼 M T 启动子的调节作用。 1 　材料和方法 11 　材料 限制性内切酶 , 修饰酶和 199 培养基购自 GIBCO/ BRL 公司 , Polybrene 由瑞士 Fluka 公司提供 , 14 C氯霉素来自英国 Amersham 公司 , 小鼠 M T 启动子和虹鳟鱼 M T 启动子分别来自瑞士分子生物学 　收稿 ,修回 　本研究为“七五”期间国家“八六三”高技术项目 本文负责作者 © 1994-2006 China Academic Journal Electr