FIVgp40七肽重复区基因的克隆表达及其产物的纯化.pdfVIP

维普资讯 第 19卷 1期 中 国 病 毒 学 22— 26 2004年 2月 VIR0L0GICA SINICA February 2OO4 FIVgp40七肽重复区基因的克隆表达及其产物的纯化 王春平 ，朱杰青2，康 云 ， 高 福 ，田 波 ，2 (1．武汉大学生命科学学 院现代病 毒学研 究室，湖北武汉 430072：2．中国科学院微生物研究所分子病毒室，北京 100080：3Nu．eld DepartmentofClinicalMedicine，JohnRadcli．eHospital，UniversityofOxford，OxfordOX39DU，UK) CloningandExpressionofHeptadRepeatRegionoftheFeline immunodeficiencyvirusandProductPurification WANG Chun．ping，ZHU Jie．qing ，KANG Yun ，GeorgeE Gao ，TIEN Po， J．ModernVirologyLaboratory，CollegeofLifeScience，WuhanUniversity，Wuhan430072，China；2．Departmentof MolecularVirology，InstituteofMicrobiology,ChineseAcademyofSciences，Beijing 100080,China；3．Nu．eld DepartmentofClinicalMedicine，JohnRadcli．eHospital,UniversiytofOxford,OxfordOX39DU,UK Abstract：By using acomputationalprogram ，Learn Coil．VMF，we determinedthetwo conserved heptadrepeatregionsfHR1and R2)ofFIVgp40protein．Thegeneofgp40subdomainincludingHR1 and HR2 wasconstructed with PCR method．TheHR1and HR2 were subsequently expressed na d purifiedasasinglechainrnamed2一Helix)connectedbyasixaminoacid1inkerinE colGSTfusion expression system ．The single HR1and HR2 were also cloned and expressed in the sameway． Subsequentlythe2．Helix Sformationofoligomerwastested．Th eresultsshowedthattheHR1and HR2interactedwitheachotherandformedanoligomer． Keywords：Felineimmunodeficiencyvirus(FIV)；gp40；Heptadrepeatregion；2·Helix；Oligomer 摘要：本研究利用LearnCoil—VMF程序预测到FIVEnv蛋白gp40存在两个七肽重复区 (Heptadrepeat，HR1和 HR2)，对包括HR1和HR2在内的部分 gp40胞外区基因 (称为HRI—HR2)进行了人工合成，以此基因为模板 获得了HR1和HR2基因的扩增产物，同时构建了朋氨基酸连接子 SGGRGG将HR1和HR2连接起来的串联基因 (即HR1linkerHR2，命名为2-Helix)，采用人肠杆菌GST融合表达系统对HRl、HR2和 2-Helix蛋 白进行了表 达，并对 2-Helix进行了纯化。同时利用凝IJ交过滤 析证明2-Helix在PBS缓冲系统中以寡聚体的形式存在。 关键词：Felineimmunodeficiencyvirus(