甘草甜素对脓毒血症引起急性肺损伤保护作用及机制与研究.docVIP

上海交通大学医学院硕士论文 甘草甜素对脓毒血症引起的急性肺损伤的保护作用 及机制研究 摘 要 急性肺损伤（acute lung injury, ALI）是一种临床上常见的危重 症，死亡率高达 35%～40%，至今尚无十分有效的治疗药物。目前的研究 认为过度的炎症反应和氧化应激是主要发生机制。脓毒血症是引起 ALI 的主要原因之一。从甘草中分离出来的三萜类有效成分--甘草甜素 (glycyrrhizin, GL),具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗凝血、免疫调节和抑 制自由基的产生等作用。目前，有关甘草甜素对脓毒血症引起的急性肺 损伤的作用及机制研究较少。 第一部分 甘草甜素对大鼠脓毒血症引起的急性肺损伤 的保护作用 目的： 观察甘草甜素对大鼠脓毒血症引起的急性肺损伤的保护作 用。 方法： 采用尾静脉注射脂多糖(LPS)建立大鼠脓毒血症引起的 ALI 模型。雄性 SD 大鼠 30 只,随机均分为 5 组：正常对照组(CON 组)、模型 组(LPS 组，尾静脉注射 LPS 7.5 mg/kg)、GL 处理组(GL1、GL2、GL3 组， I 上海交通大学医学院硕士论文 分别腹腔注射 GL 30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg，10 min 后尾静脉注 射 LPS 7.5 mg/kg)。LPS 注射后 12 h，测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞总数、IL-6 的浓度、总蛋白的含量，肺组织髓过氧化物 酶（MPO）的活性和湿干重比值，并观察肺组织病理学变化。 结果: 与 CON 组相比，LPS 组 BALF 中白细胞总数、总蛋白含量、IL-6 的浓度，肺组织 MPO 的活性和湿干重比值明显增加（P0.05）；LPS 组 肺组织切片观察见明显的炎细胞浸润、肺泡及间质充血、水肿。与 LPS 组相比，GL1、GL2、GL3 组 BALF 中白细胞总数、总蛋白含量、IL-6 的浓 度、肺组织 MPO 的活性和湿干重比值均降低（P0.05）；病理学损伤也 减轻。GL3 组损伤减轻较 GL1、GL2 组更为明显（P0.05）。其中 GL3 组 BALF 中白细胞总数、总蛋白含量、肺组织 MPO 的活性均低于 GL1 和 GL2 组（P0.05）；GL3 和 GL2 组 BALF 中 IL-6 的浓度低于 GL1 组（P0.05）。 结论：GL 能够减轻脓毒血症引起的炎性细胞浸润和肺泡毛细血管屏 障损伤，从而对 ALI 具有保护作用，且在 30~120mg/kg 范围内随剂量增 加效果更明显。 第二部分 Toll 样受体 4 在脓毒血症引起的急性肺损伤 模型中的表达及甘草甜素对其的影响 目的: 观察大鼠静脉注射 LPS 后肺组织中 TLR4 的表达及 GL 对其的 影响。 II 上海交通大学医学院硕士论文 方法: 采用尾静脉注射 LPS 建立大鼠脓毒血症引起的 ALI 模型。为 了观察 LPS 注射后不同时间点肺组织中 TLR4 的表达，雄性 SD 大鼠 15 只, 随机均分为 5 组：正常对照组(CON 组)、LPS 模型组 I、II、III、IV（I、 II、III、IV 组，分别于注射 LPS 后 6h、12h、18h、24h 处死大鼠取肺 组织样本）。通过 real time PCR 和 Western boltting 方法检测大鼠肺 组织中 TLR4mRNA 和蛋白的表达水平。为了观察 GL 对 LPS 引起的大鼠肺 组织中 TLR4 的表达变化的影响，雄性 SD 大鼠 15 只,随机均分为 3 组： 正常对照组(CON 组)、LPS 模型组（LPS 组,尾静脉注射 LPS 7.5 mg/kg）、 甘草甜素处理组（GL 组, 腹腔注射 GL 120mg/kg，10 min 后静脉注射 LPS 7.5 mg/kg）。所有大鼠于 12h 后处死，取肺组织用与上述相同的方法检 测 TLR4mRNA 的表达。 结果: 与 CON 组相比(1.0053±0.4922)，I、II、III、IV 组肺组织 中 TLR4mRNA 的表达分别下降至 0.7090±0.1022、0.4897±0.0988、 0.5627±0.0831、0.3513±0.0622 (P＜0.05)。TLR4 蛋白表达水平在 II、 III、IV 组均下降。在观察 GL 对 LPS 引起的大鼠肺组织中 TLR4 的表达 变化的影响的实验中，GL 组与 LPS 组 TLR4mRNA 的表达分别为 0.6118± 0.1426、0.5701±0.1334，差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论: 在静脉注射 LPS 引起的急性肺损伤模型中，肺组织内 TLR4mRNA 和蛋白的表达均下降，GL 对此未见明显影响。 III 上海交通大学医学院硕士论