蛋白质芯片及其应用85958.pdfVIP

维普资讯 256 中国生化药物杂志 ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2006年第 27卷第4期 蛋 白质芯片及其应用 严春光，陈钧辉，王新 昌 (南京大学 生物化学系 医药生物技术国家重点实验室，江苏 南京 210093) 摘 要：目的 大规模的基于组学和蛋 白质组学的方法发现了大量的新蛋 白质，这就给生命科学带来了新的挑 战：高通量地研 究这些蛋 白质 ，并发现它们的功能。蛋 白质芯片技术 的发展 ，使得这一问题迎刃而解。此文就蛋 白 质芯片技术的原理、制备 、探针标记 、信号检测、数据处理 、分类、芯片实验室、应用及存在的f*-I题作 出了阐述。 关键词 ：蛋 白质芯片；分类 ；芯片实验室 ；应用；问题和展望 中图分类号 ：TQ93 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—1678(2006)04—0256—03 Proteinarraysandtheir印plications YANChun—guang，CHENJun—hui，WANGXin—chang (StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalBiotechnology，DepartmentofBiochemistry，Na ngUniversity， Ⅳ0 ng210093，China) 随着后基 因组时代 的到来及生物芯片技术 的不断完善 ， 质靶标不仅纯度要高，而且要保持生物活性 ，所 以溶解蛋 白 基 因芯片已被广泛运用于生命科学 的各个领域 。基 因芯片 质要选用合适的缓冲溶液。现在一般采用含 4o％甘油 的磷 的3个主要功能是：(1)分析基 因差异表达 ；(2)检测单核苷 酸盐缓冲溶液(PBS)溶解蛋 白质 ，一方面可 以防止水分的蒸 酸多态性 ；(3)检测相关序列的存在uJ。分析基因差异表达 发，另一方面又可防止蛋 白质变性，保持其固有的生物活性。 时，我们往往是根据 mRNA间的差异来推断细胞等功能的变 然后将供试 品点在芯片上 ，并将蛋 白质 固定在芯片上 ， 化 ，要知道直接执行细胞功能 的是蛋 白质而非 mRNA，而且 ， 以膜为载体的芯片固定时，只要将其放人湿盒 中，37℃，1h 在很多情况下 ，细胞 中蛋白质水平与相应 的mRNA水平相关 即可 ；醛基修饰 的玻璃芯片固定时，是醛基和蛋 白质 中的氨 性很差_2J。所 以为 了进一步研究细胞或组织功能的变化 ，我 基通过共价结合而 固定 。 们就要在蛋 白质组水平上进行 ，而传统的方法既繁琐又费 最后是蛋 白质芯片的封 闭，将芯片上未与蛋 白质靶标结 时。为 了满足高效、快速 、高通量检测 的需要 ，蛋 白质芯片应 合的区域 ，用相对于芯片反应的惰性物质进行封 闭，防止待 运而生。蛋 白质芯片的产生能将基因组学平 台和蛋 白质组 测供试品中的蛋 白质与固相载体上 的活性基团结合而产生 学平台很好地连接起来 J。 假阳性 。现 在常 用 的封 闭剂 有小 牛血 清 蛋 白(BSA)和 1 蛋 白质芯片的原理 (Gly)【J2。。 蛋 白质芯片是将各种蛋 白质有序地 固定在玻片、凝胶 、 3 蛋 白质芯片中探针的标记 微孑L板等各种载体上形成密集蛋白质芯片，用来高通量地测 标记的对象可 以是蛋 白质、酶或其它配基_4I32。。标记 定蛋白质的生物活性 ，如酶活性、蛋 白质一蛋 白质间及蛋白质． 物既可 以是荧光染料 ，也可 以是酶_4|32。。还有将 红色荧光 其它分子 ，如蛋 白质一DNA、蛋 白质一配基 间的相互作用[]一。 蛋 白(RFP)和绿色荧光蛋 白(GFP)作为标纪物 的_55_。这种标 2 蛋 白质芯片的制备