假单胞菌反式氯双烯内酯异构酶基因克隆和序列分析木.pdfVIP

应用与环境生物学报 2006，12(5)：674—677 ChinJAppiEnvironBioi=ISSN 1006-687X 假单胞菌反式氯双烯 内酯异构酶基 因 克隆和序列分析木 钟文辉 何国庆2{ 孙明 冯孝善4 喻子牛 (’南京师范大学化学与环境科学学院 南京 210097；浙江大学生物系统工程与食品科学学院 杭州 310029) (华中农业大学生命科学技术学院 武汉 430070；浙江大学环境与资源学院 杭州 310029) 摘 要 从土壤中分离得到一株降解2，4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株GT241—1，从该菌株中克隆出参与降解2，4一 二氯酚的反式氯双烯内酯异构酶基因(acpE)．克隆策略是采用Southern杂交对其邻近基因进行定位后构建基因组文 库 ，再用斑点杂交从基因文库中筛选 目的转化子．经序列测定得知，acpE基因编码区1062bp．核苷酸和推测的编码氨 基酸序列分析表明，acpE与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异．图5表 1参 12 关键词 假单胞菌；2，4-二氯酚；反式氯双烯内酯异构酶基因；基因克隆 CLC X172 ：Q78 CloningandSequenceAnalysisoftrans·chlorodienelactone IsomeraseGenefrom Pseudomonassp． ZHONGWenhui，HE Guoqing一 ，SUN Ming ，FENG Xiaoshan YU Ziniu (’CollegeofChemistryandEnvironrrventalScience，NanjingNormalUniversity，Nanjing210097，China) (ColelgeofBiosystemEngineeringand FoodScience，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China) (ColelgeofLifeSceinceand Technology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China) (CollegeofEnvironmentaland ResourceSceinces，ZhejiangUniversity。Hangzhou310029，China) Abstract A 2，4-dichlorophenoldegradingPseudomonasstrain GT241—1wasisolatedfrom soilsample．Thetrans—chloro— dienelactoneisomerasegene(dcpE)wasclonedrfom thisbacterialstrain．Thecloningstrategywasappliedtoconstruct genomiclibraryafterlocationofitsneighbouringgenebySouthernblotandtoscreenthetargettransformantbydotblotting．Se— quencingresultsshowedthatthelengthofdcpEwas1062bp．Th esequenceofpE andthededucedaminoacidweredifferent rfom therelativesequencesregisteredintheGenBank．Fig5，Tab1，Ref12 Keywords Pseudomonas；2，4一dichlorophenol；tram —chlorodienelactoneisomerasegene；genecloning CLC X172 ：Q78 2，4一DCP及其衍生物是有毒、难降解化合物，是环境保护 对2，4一DCP的厌氧生物降解进行了广泛的研究 ’ ，也有对 中需要控制的一大类污染物